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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 昆蟲觸角總RNA提取疑問
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含羞草liu新蟲 (小有名氣)
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昆蟲觸角總RNA提取疑問
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我現(xiàn)在在提取蛾子觸角的總RNA，采用的試劑是Trizol，提取后電泳檢測，結(jié)果都是只有一條帶，大概在900bp左右，已反復試驗幾次，得到的結(jié)果都是一樣的，只有一條帶900bp左右。電泳圖見附圖1. 為了驗證我提取的產(chǎn)物是否為DNA，我同時提取了總DNA，電泳后發(fā)現(xiàn)有兩條帶，一條在2000bp以上，一條在在900bp左右。電泳圖見附圖2. 后來，我又用了柱式動物組織總RNA提取純化試劑盒，按說明書的操作進行，最后提取的產(chǎn)物跑膠后也只有一條帶，大小在2000bp以上，與總DNA電泳的上層條帶大致位置相同。見圖3. 根據(jù)得到的結(jié)果推測，兩種RNA提取方法，可能只是提取出特定大小的基因組DNA。但我不明白，為什么按提RNA的方法只能提出DNA，還只有這特定的大�。縍NA又在哪呢？ 注：在提取的過程中，為了使裂解更充分，我用Trizol處理的時間為冰上靜置半小時。為了使RNA沉淀更充分，我加異丙醇后，30℃溫育30min。加氯仿后吸取的上清液是透明的，但異丙醇沉淀后就出現(xiàn)了黑色的雜質(zhì)，看不到白色的RNA沉淀。 不明白是什么原因。 請有經(jīng)驗的幫忙分析一下，感激不盡�。�！ 圖1 圖2 圖3 |
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，不必看提取的RNA分子量的，沒有意義。實際上表明上也是為了看提取的28S和18S的情況，來估計總RNA的情況。樓主的情況不于重復提取，應該仔細思考每個提取過程，從材料收集、保存、研磨是否充分等等，最重要的是預防RNA酶，這個最重要了。祝實驗找到問題所在，加油！ 6樓2012-04-01 20:31:53
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