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danyzj01銀蟲 (正式寫手)
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[交流]
PCR提取試劑盒不見了，手動(dòng)配置DNA提取試劑一般都需要準(zhǔn)備哪些試劑？ 已有8人參與
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| 請(qǐng)問(wèn)試劑的名稱及其濃度是多少？ |
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atlanticwi
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 很詳細(xì)了 2012-03-31 09:37:57
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 很詳細(xì)了 2012-03-31 09:37:57
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嗯.................. 那么是說(shuō)CTAB法提取DNA吧 那么我貼我自己的方案了: Reagents: CTAB Extraction Buffer: 50 mL 2 %(V/V) CTAB--------1.000 g 100mM Tris-Hydrochloric acid(pH 8.0)--------0.605 g 1.4M Sodium chloride--------4.091 g 20mM EDTA•Na2--------0.372 g Sterilize reagent and store at -4 °C ---------------------------------------------------------------------------------------------------- Wash Buffer: 20 mL 76 % Ethanol--------15.2 mL Anhydrous ethanol 10mM Ammonium acetate--------0.015 g Distill water--------up to 20 mL 自個(gè)有把Protocol翻譯成英文的習(xí)慣，所以你湊合的看吧，這是用于我們提植物基因組DNA用的，不知是否能用于你的實(shí)驗(yàn) 希望有所幫助  若有錯(cuò)的話請(qǐng)高手指正 |
4樓2012-03-30 23:19:17
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
danyzj01: 回帖置頂 2012-04-15 21:26:06
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
danyzj01: 回帖置頂 2012-04-15 21:26:06
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以前做的了： 我提的細(xì)胞的 手提基因組： 用胰蛋白酶消化HEL細(xì)胞，收集約106－108個(gè)細(xì)胞，500×g離心5min，棄上清 。再加入PBS重懸細(xì)胞，500×g離心5min，棄上清，將多余的PBS吸凈。加入400μl裂解液（10mmol/L Tris pH 8.0，0.1mol/L EDTA，0.5% SDS），輕輕吹打，充分混勻，使細(xì)胞完全裂解。加入蛋白酶K至終濃度為100μg/ml，輕輕吹打，充分混勻，于50℃水浴中孵育3h。加入等體積的Tris飽和酚吹打混勻，12000×g離心10min，將上清移入一個(gè)新的EP管中。再加入等體積氯仿∶異戊醇（24∶1）吹打混勻，12000×g離心10min，將上清移入一個(gè)新的EP管中。加入等體積異丙醇，于－20℃沉淀過(guò)夜。12000×g離心10min，棄上清。用75％乙醇洗沉淀一次，12000×g離心10min，棄上清，室溫干燥。加入50μl含RNase（濃度為20μg/ml）的TE（10 mmol/L Tris，1 mmol/L EDTA pH8.0）溶解DNA沉淀，可于37℃助溶。 手提質(zhì)粒的那個(gè)配方?jīng)]找到，只記得1，2,3,4號(hào)液了，用的是NaOH的堿裂解法 查了下，和這個(gè)http://shiyan.ebioe.com/3838.htm 差不多，只不過(guò)沒他這個(gè)復(fù)雜，當(dāng)時(shí)只是小題鑒定，沒后面的RNA酶的部分。 [ Last edited by telomerase on 2012-4-3 at 14:15 ] |
13樓2012-04-03 13:49:42
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3樓2012-03-30 22:59:53
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8樓2012-04-01 19:13:26
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9樓2012-04-02 08:54:51
10樓2012-04-02 20:51:48
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