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dfm1987新蟲 (初入文壇)
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PBI121載體轉(zhuǎn)化擬南芥，Tail-PCR擴(kuò)增整合位點(diǎn)側(cè)翼序列，為何只擴(kuò)增得到載體部分序列？ 已有1人參與
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| 我用熱不對(duì)稱方法擴(kuò)增PBI121載體轉(zhuǎn)化擬南芥得到的轉(zhuǎn)化子的T-DNA整合位點(diǎn)側(cè)翼序列；上游簡(jiǎn)并引物和下游特異性序列（RB區(qū)域）都是別人文獻(xiàn)當(dāng)中用過(guò)的，但是第三輪引物擴(kuò)增的結(jié)果1000bp左右，經(jīng)測(cè)序結(jié)果驗(yàn)證依然是PBI121的序列（RB區(qū)域上游）。我一直以為PBI121的整合特點(diǎn)是從RB和LB區(qū)域斷開，整合到植物基因組中，但是我擴(kuò)增出的結(jié)果又好像不是。求解，請(qǐng)各位大俠幫幫忙！還有一般大家是用哪種方法擴(kuò)增T-DNA整合位點(diǎn)側(cè)翼序列的？ |
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太極拳
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dfm19876樓2012-04-10 09:48:41
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【答案】應(yīng)助回帖
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lz你的情況和我很相似啊 我是設(shè)計(jì)的LB的引物 然后調(diào)到了載體內(nèi)部去了 序列比對(duì)的時(shí)候發(fā)現(xiàn)NCBI上面PBI121這個(gè)載體有幾個(gè)修改過(guò)的 它們的LB RB是反的 所以我目前把引物反過(guò)來(lái)設(shè)計(jì)準(zhǔn)備重新調(diào)了  |
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8樓2012-04-10 17:10:04
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10樓2013-04-01 22:40:14
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