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zhliang986金蟲 (小有名氣)
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[求助]
做酶標(biāo)抗體時(shí)所用抗體的處理？
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| 我想用HRP標(biāo)記我的單抗，查了一些資料準(zhǔn)備用過碘酸鈉法做，我的抗體是用蛋白G柱子純化后用PH7.4的PBS透析的，之后分裝-20保存，我看資料上要用純的抗體溶在水里，而且得20mg，我的單抗才0.5mg/ml，而且是溶在PBS里的，我用冷凍干燥機(jī)做了一次 干燥完都是PBS結(jié)晶，請(qǐng)問我怎么處理才能得到單純的抗體而且保存活性，大家做酶標(biāo)抗體時(shí)都是怎么處理的？謝謝！ |
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jfj_tj
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telomerase: 金幣+2, 謝謝你的熱心應(yīng)助！！ 2012-04-10 13:15:35
telomerase: 金幣+2, 謝謝你的熱心應(yīng)助！！ 2012-04-10 13:15:35
| 超濾管難在對(duì)其分子量的摸索上，用好了，應(yīng)該說效果還是比較好的�？茨阍趺催\(yùn)用就是。不知道怎么在小木蟲上把文章給你，就把其中一篇的題目給你吧：Monitoring of organophosphorus pesticides in vegetables using monoclonal antibody-based direct competitive ELISA followed by HPLC–MS/MS，其中有一些這篇文章參考的文獻(xiàn)也還行。希望對(duì)你有用 |
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zhliang986
4樓2012-04-08 23:13:01
jfj_tj
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zhliang986: 金幣+5, ★★★很有幫助, 我聽實(shí)驗(yàn)室的說超濾管做的效果不是很好，所以我一直沒用，你有沒有好的文獻(xiàn)幫我推薦幾篇��？ 2012-04-08 20:55:36
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zhliang986: 金幣+5, ★★★很有幫助, 我聽實(shí)驗(yàn)室的說超濾管做的效果不是很好，所以我一直沒用，你有沒有好的文獻(xiàn)幫我推薦幾篇��？ 2012-04-08 20:55:36
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蛋白濃度有點(diǎn)低呢！建議嘗試下超濾管，可以很好的濃縮抗體也能除鹽； 再者，現(xiàn)在有很多改進(jìn)的過碘酸鈉法將單抗偶聯(lián)到HRP上了，可以找找一些文獻(xiàn)，不用20mg的，你可以根據(jù)投料比進(jìn)行試驗(yàn)設(shè)計(jì)。 |
2樓2012-04-08 13:09:35
zhliang986
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3樓2012-04-08 20:57:44
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試試透析的方式，透析液采用PEG20000，既可以除鹽又可以濃縮，不過要選擇優(yōu)質(zhì)的透析袋和合適的透析孔徑，生物公司都有的 |
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5樓2012-04-09 00:23:07
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6樓2012-04-09 08:20:35
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7樓2012-04-09 08:25:50
8樓2012-04-09 13:44:37
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9樓2012-04-09 18:27:11
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可以的，用PBS透析抗體，最終抗體中也是PBS溶液，透析過程中注意低溫，防止抗體失活，實(shí)驗(yàn)順利！ |
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10樓2012-04-11 22:19:28
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