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yitiandeng木蟲 (著名寫手)
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[求助]
求助具體的(具體的)無(wú)連接酶亞克隆法全步驟,從PCR到克隆
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無(wú)連接酶亞克隆法![]() ![]() ![]() ![]() ,請(qǐng)親們看好說(shuō)明啊,別解釋原理什么的[ Last edited by yitiandeng on 2012-4-8 at 15:52 ] |
鐵桿木蟲 (著名寫手)
| 提供三篇相關(guān)文獻(xiàn),希望對(duì)樓主有幫助。 |
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣

鐵桿木蟲 (正式寫手)
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你是不是說(shuō)的是Invitrogen公司的Gateway技術(shù)? 1.高保真酶利用前引物含有CACC的引物組合克隆目的片段,純化回收 2.Invitrogen公司pENTR載體試劑盒 pENTR 1UL Salt solution 1ul PCR 產(chǎn)物 3ul 25度反應(yīng)半小時(shí)后,轉(zhuǎn)化大腸桿菌。 |

金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
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樓主問(wèn)的是亞克隆技術(shù)哦,不是我挑刺,嚴(yán)格的說(shuō),入門克隆并不算亞克隆技術(shù),而是克隆技術(shù),之后的LR反應(yīng)轉(zhuǎn)入不同的載體才算是亞克隆技術(shù),況且如果你以下的反應(yīng)體系是搬自說(shuō)明書的話,也是錯(cuò)的,說(shuō)明書推薦6uL體系,你總共加起來(lái)只有5uL,反應(yīng)半個(gè)小時(shí),是會(huì)極大降低重組效率的,說(shuō)明書一般推薦5min左右,隨片段長(zhǎng)度而改變,我們就是用3Kb的去連接也只用15min左右,所以朋友,要嚴(yán)謹(jǐn) |

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