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[求助]
誰幫我算一下連接體系啊？？能教我一下嗎？？
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謝謝大家~~ market：DL2000。目的片段：1331bp。載體：2692bp |
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zy_696969
金蟲 (小有名氣)
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西瓜: 編輯內(nèi)容 2012-04-11 22:12
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西瓜: 金幣+4, 鼓勵(lì)應(yīng)助！目的基因和載體算出個(gè)比例就好啦，不必引入單位來計(jì)算滴 2012-04-11 22:14:25
西瓜: 編輯內(nèi)容 2012-04-11 22:12
西瓜: 編輯內(nèi)容 2012-04-11 22:12
西瓜: 金幣+4, 鼓勵(lì)應(yīng)助！目的基因和載體算出個(gè)比例就好啦，不必引入單位來計(jì)算滴 2012-04-11 22:14:25
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我們一般是這么做的： 1 先把目的基因和載體以同樣的量上樣跑膠（比如說都是3微升上樣） 2 估算目的基因和載體的亮度比"X" 3 公式計(jì)算 回收的PCR產(chǎn)物片段（即目的基因）：回收的載體片段=10:1 目的基因：0.3×10^(-3)(pmol)×660×1331bp=263.538ng 載體：0.03×10^(-3)(pmol)×660×2692bp=53.3016ng 目的基因：載體=(263.538/53.3016)/(目的基因和載體的亮度比"X" )  4 確定連接體系 我們用的是T4連接體系 10微升，其中確定的是： ①10× T4 Buffer 1微升 ②T4 DNA Ligase 0.4微升 ③目的基因和④載體按比例加入這個(gè)體系，如果不滿10微升加⑤ddH2O加滿即可。 [ Last edited by 西瓜 on 2012-4-11 at 22:12 ] |
7樓2012-04-09 15:08:38
2樓2012-04-08 19:03:01
3樓2012-04-08 19:10:52
果子么么茶
木蟲 (著名寫手)
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4樓2012-04-08 20:24:50
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