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baby1_9253344金蟲 (小有名氣)
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[求助]
重組質粒丟失一個堿基是否影響表達
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如題，欲將外源基因插入PET30a質粒的多酶切位點，表達蛋白。測序后發(fā)現(xiàn)在rbs前面的基因處少了個堿基A，別的地方都正常。不知道這樣是否會造成錯位，影響蛋白表達？ 如圖，紅圈標出位置本應是AAA，但測序結果是AA....前面測序的圖挺丑的，不過后面的峰還是挺分明的（見附件），新手，不懂怎么看測序圖。求高手解答~~ 測序圖[ Last edited by baby1_9253344 on 2012-4-10 at 20:13 ] |
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2012-04-10 20:12:36, 257.25 K
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| "ATG上游的序列不涉及閱讀框，所以在5’端HindIII位點到ATG的序列不會帶來移碼突變。但是在大腸桿菌中核糖體受一段富含嘌呤的SD序列引導從而識別AUG起始密碼，核糖體結合位點RBS和起始密碼AUG之間的距離以及堿基的組成對翻譯的效率有顯著影響，在設計的時候要注意。 一般建議在ATG上游加入保守序列5'-UAAGGAGGUGA-3'（其中AGGAGG是RBS保守序列），并根據(jù)預實驗結果調(diào)節(jié)，如果載體本身已經(jīng)帶了RBS序列就可以不加。同時在ATG與RBS之間要有一定的空間序列（約小于10個堿基）， 可以采用靶基因ATG上游的序列。"這是在網(wǎng)上搜到的... |
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