版塊導(dǎo)航: 正在加載中...

登錄注冊

應(yīng)《網(wǎng)絡(luò)安全法》要求，自2017年10月1日起，未進(jìn)行實(shí)名認(rèn)證將不得使用互聯(lián)網(wǎng)跟帖服務(wù)。為保障您的帳號能夠正常使用，請盡快對帳號進(jìn)行手機(jī)號驗(yàn)證，感謝您的理解與支持！

24小時熱門版塊排行榜

返回列表

曉婧happy

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 567.1
帖子: 42
在線: 18.7小時
蟲號: 1490093

[交流] PCR產(chǎn)物再進(jìn)行PCR

大家有木有做過PCR回收產(chǎn)物為模板擴(kuò)增目的基因啊？我聽說是可行的，可我們老師說不穩(wěn)定，很不穩(wěn)定，大家給個意見吧，謝謝

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有148人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有15人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

相同條件的pcr產(chǎn)物，跑出不同的條帶，是什么原因[/img][/img][/img] 已經(jīng)有12人回復(fù)
我的pcr產(chǎn)物怎么跟瀑布一樣，究竟是為什么已經(jīng)有46人回復(fù)
二次PCR產(chǎn)物彌散已經(jīng)有12人回復(fù)
熒光定量PCR與普通PCR產(chǎn)物不一樣？已經(jīng)有6人回復(fù)
PCR產(chǎn)物與T載體連不上求助已經(jīng)有29人回復(fù)
【求助/交流】如何對PCR測序產(chǎn)物進(jìn)行分析？已經(jīng)有11人回復(fù)
【求助/交流】PCR產(chǎn)物的瓊脂糖電泳圖片已經(jīng)有27人回復(fù)
【求助/交流】關(guān)于PCR產(chǎn)物的突變已經(jīng)有7人回復(fù)
【求助/交流】PCR產(chǎn)物電泳檢測已經(jīng)有20人回復(fù)
【求助/交流】PCR產(chǎn)物連接請教！已經(jīng)有5人回復(fù)
【問題反饋】一對引物擴(kuò)出來的產(chǎn)物測序后竟然是很多質(zhì)粒的PCR產(chǎn)物，再怎么區(qū)分呢？已經(jīng)有10人回復(fù)
【求助/交流】（5.20更新）PCR產(chǎn)物電泳沒有條帶，why? 已經(jīng)有20人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2012-04-12 14:47:14

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

回帖置頂 ( 共有1個 )

gaoyang636

木蟲 (著名寫手)

★ ★ ★ ★
曉婧happy(金幣+1): 謝謝參與
amisking: 金幣+3, 鼓勵幫助解答，歡迎繼續(xù)交流。 2012-04-12 17:54:23
西瓜: 回帖置頂 2012-04-12 23:45:25

有一個問題你沒說清楚：PCR產(chǎn)物回收后做模板再次進(jìn)行PCR，那么這個第二輪 PCR的引物是另一套，還是相同的引物？
如果是另一套，比如內(nèi)測引物，這種nested-PCR沒問題，并且常常使用；
而如果是相同引物，的確不穩(wěn)定：
產(chǎn)物做模板的濃度需要摸索；由于Taq酶的不保真引起的產(chǎn)物輕微差別也會有不利影響等等；所以說，可以考慮將回收產(chǎn)物轉(zhuǎn)化并篩菌，拿菌液做模板，就很容易了

贊一下(2人)

回復(fù)此樓

6樓2012-04-12 16:03:57

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

普通回帖

ycttfeng

木蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 3049.5
帖子: 88
在線: 31.1小時
蟲號: 968870

★
曉婧happy(金幣+1): 謝謝參與

可行啊

回復(fù)此樓

2樓2012-04-12 14:54:59

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

imyting

至尊木蟲 (正式寫手)

★
曉婧happy(金幣+1): 謝謝參與

可行

回復(fù)此樓

3樓2012-04-12 15:22:32

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

風(fēng)之語007

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 5293.2
帖子: 83
在線: 41.8小時
蟲號: 1482345

★
曉婧happy(金幣+1): 謝謝參與

可行的

回復(fù)此樓

4樓2012-04-12 15:50:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dfl204

鐵桿木蟲 (著名寫手)

★ ★ ★
曉婧happy(金幣+1): 謝謝參與
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-04-12 23:45:14

如果第一輪PCR產(chǎn)物量很低的話可以用來作為下一輪PCR的模板。
巢氏PCR都是經(jīng)過兩輪擴(kuò)增的。

用高保值度的酶和較高的退火溫度是可以基本保證產(chǎn)物的特異性的。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2012-04-12 16:01:08

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

曉婧happy

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 567.1
帖子: 42
在線: 18.7小時
蟲號: 1490093

西瓜: , 絕對可行！ 2012-04-12 23:45:48

引用回帖:

6樓: Originally posted by gaoyang636 at 2012-04-12 16:03:57:
有一個問題你沒說清楚：PCR產(chǎn)物回收后做模板再次進(jìn)行PCR，那么這個第二輪 PCR的引物是另一套，還是相同的引物？
如果是另一套，比如內(nèi)測引物，這種nested-PCR沒問題，并且常常使用；
而如果是相同引物，的確不穩(wěn) ...

不是相同的引物，是想從得到的基因片段上再擴(kuò)增出一部分片段，這樣是可行的吧？我現(xiàn)在也做了轉(zhuǎn)化了，以后就用菌液當(dāng)模板了

贊一下

回復(fù)此樓

7樓2012-04-12 16:18:15

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

曉婧happy

銅蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 567.1
帖子: 42
在線: 18.7小時
蟲號: 1490093

引用回帖:

5樓: Originally posted by dfl204 at 2012-04-12 16:01:08:
如果第一輪PCR產(chǎn)物量很低的話可以用來作為下一輪PCR的模板。
巢氏PCR都是經(jīng)過兩輪擴(kuò)增的。

用高保值度的酶和較高的退火溫度是可以基本保證產(chǎn)物的特異性的。

那我是不是需要提高退火溫度�。�

贊一下

回復(fù)此樓

8樓2012-04-12 16:20:25

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

可帥兒

銀蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
金幣: 652.1
帖子: 375
在線: 94.2小時
蟲號: 1639660

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

沒試過，不過可以嘗試一下

贊一下

回復(fù)此樓

9樓2012-04-12 18:29:04

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

ouyangtao0102

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 0 (幼兒園)
金幣: 5604.5
帖子: 503
在線: 74.8小時
蟲號: 271313

★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
西瓜: 金幣+2, Good！ 2012-04-12 23:46:04

非常同意蟲友“gaoyang636”所說的。不同引物的話基本沒問題，可以擴(kuò)增出來，如果第二輪PCR用的是同一對引物的話有的時候可以擴(kuò)出來，但有的時候是一片涂抹帶。如果第二輪用的不是同一對引物，不需要特意去提高退火溫度，按照你的這對引物的退火溫度去擴(kuò)增就是了。

贊一下

回復(fù)此樓

10樓2012-04-12 21:53:27

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

julietguo

銀蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
金幣: 80.5
帖子: 333
在線: 42.3小時
蟲號: 1464879

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

我最近也在做nested-PCR，效果挺好的。不過如果可以的話，還是設(shè)計一對特異性高一點(diǎn)的引物，這樣省得要做兩次PCR。

贊一下

回復(fù)此樓

11樓2012-04-13 08:15:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

qqm8445

金蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 646.3
帖子: 397
在線: 195.6小時
蟲號: 811725

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

可以呀，我經(jīng)常這樣做，沒有問題，說有摸帶的，是因?yàn)槟０辶刻吡�，可能要稀釋PCR產(chǎn)物100倍，甚至200倍后再做，效果就很好了。

贊一下

回復(fù)此樓

12樓2012-04-13 08:31:44

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

dappxiaomm

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 4 (幼兒園)
金幣: 440.4
帖子: 164
在線: 47.2小時
蟲號: 1461356

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

我做過，用的不同的引物，從兩端開始P，可以的

贊一下

回復(fù)此樓

13樓2012-04-13 08:54:29

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

chenglong_li

鐵桿木蟲 (正式寫手)

MolEPI: 1
應(yīng)助: 10 (幼兒園)
金幣: 5140.2
帖子: 552
在線: 117.4小時
蟲號: 1265884

引用回帖:

有道理！

回復(fù)此樓

14樓2012-04-13 13:16:07

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

youngker918

金蟲 (正式寫手)

應(yīng)助: 9 (幼兒園)
金幣: 10084.2
帖子: 515
在線: 105.6小時
蟲號: 449088

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

可以啊，把PCR產(chǎn)物稀釋100倍，取稀釋后的液體一微升作為模板加入新的PCR體系里就可以了

贊一下

回復(fù)此樓

15樓2012-04-13 18:59:35

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

我愛沈泉

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 31 (小學(xué)生)
金幣: 575.1
帖子: 124
在線: 25.6小時
蟲號: 1267942

可以咯。。

回復(fù)此樓

16樓2012-04-13 21:53:12

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

摩羯的心

鐵蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 232.3
帖子: 88
在線: 18.8小時
蟲號: 1937844

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

樓主我現(xiàn)在也是在用第一輪的PCR產(chǎn)物作為第二輪PCR的模板，引物不同，我感覺結(jié)果也是不太穩(wěn)定，剛得到的PCR產(chǎn)物做模板做二輪PCR的結(jié)果很好，但之后重復(fù)做就感覺不好了，很糾結(jié)呢？樓主是怎么做的呀我打算將第一輪PCR產(chǎn)物連接到細(xì)胞中，提取質(zhì)粒，然后做模板，進(jìn)行二輪PCR 樓主支個招吧

贊一下

回復(fù)此樓

17樓2014-04-15 09:02:41

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

艱苦溫度

新蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 368.4
帖子: 79
在線: 17.8小時
蟲號: 2795644

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

引用回帖:

17樓: Originally posted by 摩羯的心 at 2014-04-15 09:02:41
樓主我現(xiàn)在也是在用第一輪的PCR產(chǎn)物作為第二輪PCR的模板，引物不同，我感覺結(jié)果也是不太穩(wěn)定，剛得到的PCR產(chǎn)物做模板做二輪PCR的結(jié)果很好，但之后重復(fù)做就感覺不好了，很糾結(jié)呢？樓主是怎么做的呀我打算將第一輪 ...

你第一輪做完后電泳檢測了嗎？還是直接進(jìn)行第二輪PCR？

贊一下

回復(fù)此樓

18樓2014-04-18 17:56:39

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

摩羯的心

鐵蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 232.3
帖子: 88
在線: 18.8小時
蟲號: 1937844

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

引用回帖:

18樓: Originally posted by 艱苦溫度 at 2014-04-18 17:56:39
你第一輪做完后電泳檢測了嗎？還是直接進(jìn)行第二輪PCR？...

檢測了條帶很亮而且純化后再進(jìn)行的第二輪第二輪有時候除了第二次的目的條帶之外做模板的那條帶也會純在

贊一下

回復(fù)此樓

19樓2014-04-19 10:20:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

sobarrygar

新蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 2 (幼兒園)
金幣: 33.8
帖子: 15
在線: 13.5小時
蟲號: 3331624

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖

請問你pcr的產(chǎn)物是什么？ssr還是aflp的呀，ssr感覺不行吧

贊一下

回復(fù)此樓

20樓2015-01-09 09:01:11

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn) 我要訂閱樓主曉婧happy 的主題更新

返回列表

普通表情龍兔虎貓高級回復(fù) (可上傳附件)

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]		作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 297求調(diào)劑 +5	田洪有 2026-03-26	5/250	2026-03-26 15:43 by 無際的草原
[考研] 一志愿西北大學(xué) 總分282 英語一62 求調(diào)劑 +6	18419759900 2026-03-25	6/300	2026-03-26 13:58 by 催化大白
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +3	邱gl 2026-03-26	5/250	2026-03-26 13:33 by 邱gl
[考研] 招08考數(shù)學(xué) +8	laoshidan 2026-03-20	17/850	2026-03-25 17:52 by 一個紅太陽
[考研] 求b區(qū)院校調(diào)劑 +4	周56 2026-03-24	5/250	2026-03-25 17:12 by yishunmin
[考研] 347求調(diào)劑 +4	L when 2026-03-25	4/200	2026-03-25 13:37 by cocolv
[考研] 考研化學(xué)308分求調(diào)劑 +10	你好明天你好 2026-03-23	11/550	2026-03-25 10:23 by userper
[考研] 318求調(diào)劑 +3	plum李子 2026-03-23	3/150	2026-03-25 09:42 by 霧散后相遇lc
[考研] 311求調(diào)劑 +3	冬十三 2026-03-24	3/150	2026-03-24 21:31 by peike
[考研] 292求調(diào)劑 +4	鵝鵝鵝額額額額?/a> 2026-03-24	4/200	2026-03-24 16:41 by peike
[考研] 321求調(diào)劑 +4	Ymlll 2026-03-24	4/200	2026-03-24 14:44 by sprinining
[考研] 【雙一流院校新能源、環(huán)境材料，材料加工與模擬招收大量調(diào)劑】 +4	Higraduate 2026-03-22	7/350	2026-03-24 11:23 by 種大樹
[考博] 26申博自薦 +3	whh869393 2026-03-24	3/150	2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 335求調(diào)劑 +4	yuyu宇 2026-03-23	5/250	2026-03-23 23:49 by Txy@872106
[考研] 269求調(diào)劑 +4	我想讀研11 2026-03-23	4/200	2026-03-23 21:25 by pswait
[考研] 291求調(diào)劑 +5	孅華 2026-03-22	5/250	2026-03-23 09:20 by haoshis
[考研] 280分求調(diào)劑一志愿085802 +4	PUMPT 2026-03-22	7/350	2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 材料求調(diào)劑 +5	@taotao 2026-03-21	5/250	2026-03-21 20:55 by lbsjt
[考研] 266求調(diào)劑 +3	哇呼哼呼哼 2026-03-20	3/150	2026-03-21 16:46 by barlinike
[考研] 南昌大學(xué)材料專碩311分求調(diào)劑 +6	77chaselx 2026-03-20	6/300	2026-03-21 07:24 by JourneyLucky

24小時熱門版塊排行榜

[交流] PCR產(chǎn)物再進(jìn)行PCR

» 猜你喜歡

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

» 搶金幣啦！回帖就可以得到: 查看全部散金貼

» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼