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yinxiang_1銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
DEAE純化重組蛋白無(wú)法完全洗脫下來(lái)。
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我的重組蛋白吧，先過(guò)的Ni-NTA粗純化，然后復(fù)性。上的DEAE離子交換柱，每次上樣穿出液A280都有一個(gè)很高的吸收峰，SDS-PAGE檢測(cè)不到。后來(lái)發(fā)現(xiàn)有一部分目的蛋白在柱子上下不來(lái)，導(dǎo)致DEAE后純度反而變低。 嘗試用過(guò)1M NaoH，NaAc，2MNacl都無(wú)法把蛋白洗脫下（我們挖了一部分膠跑的SDS-PAGE） 請(qǐng)問(wèn)這是為什么，有什么方法可以把蛋白洗脫下來(lái)么，我蛋白等電點(diǎn)是4.7.上樣buffer pH7.4,6.5都試過(guò)。 |
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