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weining1203新蟲 (小有名氣)
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[求助]
rt-pcr電泳圖，求好心蟲友幫助分析一下，跪謝。。。
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這是今天跑得rt-pcr圖，最兩邊的的是DL2000marker，2-9號點(diǎn)樣孔為溫度梯度（45-60度），由于提的rna有dna污染，所以消化了一下。。。1號點(diǎn)樣孔為沒有經(jīng)過dnase消化的rna，也沒有經(jīng)過反轉(zhuǎn)錄，當(dāng)做對比。。。 目的條帶約860bp左右，1號點(diǎn)樣孔有明顯目的條帶，但也有雜帶，模板應(yīng)該是基因組dna，但2-9號幾乎沒有目的條帶，我想問一下是不是反轉(zhuǎn)錄又問題啊，由于沒有內(nèi)參，所以不知道是不是反轉(zhuǎn)錄有問題。。。 還有植物里有沒有通用的內(nèi)參啊，比如18s，序列為多少啊，我做的油松，找不到內(nèi)參基因，求大神指點(diǎn)啊。。。 rna 梯度pcr |
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6樓2012-04-24 01:56:58
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weining1203: 金幣+5, ★有幫助 2012-05-09 15:46:47
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我是做動物的，不知道植物的，但是，首先，你要確定你的RNA反轉(zhuǎn)的好不好，先做個內(nèi)參，跑個25-30CYCLE 要是覺得提的RNA不好，可以跑個電泳看看 你加酶消化的時候，處理的東西包括水，都是無RNase的吧？ 再說說你的電泳 你的1號樣品，說明你的引物沒有問題，提的也沒啥問題，但是，你的引物條件需要優(yōu)化，試試提高退火溫度。 你的剩下的啥都沒有P出來，有可能是你的模板的問題 最好還是做個內(nèi)參吧，沒內(nèi)參，做啥都是個虛的，你不好確定你的東西到底好不好 |
10樓2012-04-24 21:02:01
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8樓2012-04-24 09:03:05
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