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weining1203新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
rt-pcr電泳圖，求好心蟲(chóng)友幫助分析一下，跪謝。。。
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這是今天跑得rt-pcr圖，最兩邊的的是DL2000marker，2-9號(hào)點(diǎn)樣孔為溫度梯度（45-60度），由于提的rna有dna污染，所以消化了一下。。。1號(hào)點(diǎn)樣孔為沒(méi)有經(jīng)過(guò)dnase消化的rna，也沒(méi)有經(jīng)過(guò)反轉(zhuǎn)錄，當(dāng)做對(duì)比。。。 目的條帶約860bp左右，1號(hào)點(diǎn)樣孔有明顯目的條帶，但也有雜帶，模板應(yīng)該是基因組dna，但2-9號(hào)幾乎沒(méi)有目的條帶，我想問(wèn)一下是不是反轉(zhuǎn)錄又問(wèn)題啊，由于沒(méi)有內(nèi)參，所以不知道是不是反轉(zhuǎn)錄有問(wèn)題。。。 還有植物里有沒(méi)有通用的內(nèi)參啊，比如18s，序列為多少啊，我做的油松，找不到內(nèi)參基因，求大神指點(diǎn)啊。。。 rna 梯度pcr |
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分析了一下你的結(jié)果，由于你的marker是跑出來(lái)了的，1號(hào)樣本沒(méi)有經(jīng)過(guò)dnase消化也跑出來(lái)了，而2-9號(hào)樣本是經(jīng)過(guò)dnase消化而沒(méi)有跑出來(lái)，因此可能是你在消化過(guò)程中DNA把RNA也給消化掉了，建議做預(yù)實(shí)驗(yàn)或是重做實(shí)驗(yàn)，再找原因，祝實(shí)驗(yàn)順利！ |
2樓2012-04-23 12:25:12
weining1203
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6樓2012-04-24 01:56:58
weining1203
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我是做動(dòng)物的，不知道植物的，但是，首先，你要確定你的RNA反轉(zhuǎn)的好不好，先做個(gè)內(nèi)參，跑個(gè)25-30CYCLE 要是覺(jué)得提的RNA不好，可以跑個(gè)電泳看看 你加酶消化的時(shí)候，處理的東西包括水，都是無(wú)RNase的吧？ 再說(shuō)說(shuō)你的電泳 你的1號(hào)樣品，說(shuō)明你的引物沒(méi)有問(wèn)題，提的也沒(méi)啥問(wèn)題，但是，你的引物條件需要優(yōu)化，試試提高退火溫度。 你的剩下的啥都沒(méi)有P出來(lái)，有可能是你的模板的問(wèn)題 最好還是做個(gè)內(nèi)參吧，沒(méi)內(nèi)參，做啥都是個(gè)虛的，你不好確定你的東西到底好不好 |
10樓2012-04-24 21:02:01
weining1203
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