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a397622406鐵蟲 (初入文壇)
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T載體酶切片段與目的片段大小不一致
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我同時做了兩個T載體，兩個目的片段，a是370bp左右，b是450bp左右，連接PMD18T-Vector后提質(zhì)粒PCR擴增片段無誤，之后進行酶切，結(jié)果切出來a是450bp左右，b是370bp左右，原以為是弄反了，結(jié)果重復兩次后還是那樣，以為是提完質(zhì)粒標錯了，結(jié)果對質(zhì)粒又PCR一次，還是無誤，求高人指點可能出現(xiàn)的問題，我兩個目的片段均選用的是KpnⅠ和Xhol作為酶切位點，T載體上有KpnⅠ位點，不過距插入位點只有20多bp，檢驗目的片段內(nèi)部沒有兩種酶切位點。附上引物：a上游CGG GGTACC TAAGTTTTATTAGGCTACTCA 下游CCG CTCGAG ATTTTAGAATCTTAACGCCAA b上游CGG GGTACC CTATGTATCCAGAACAGCCTAT 下游CCG CTCGAG GCGGAACAAGTATGTCAGT 用空格隔開的依次是保護堿基、酶切位點、引物。 在線等結(jié)果。 |
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chibang1220
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