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alqfren木蟲 (正式寫手)
研究僧
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[交流]
不同類別的蛋白酶的活力測(cè)定 已有8人參與
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根據(jù)GB23527-2009蛋白酶制劑方法，測(cè)定方法中蛋白酶緩沖液分為三種磷酸、乳酸、硼酸，pH分別為7.5、10.5、3.0，分別用于稀釋中性、堿性、酸性蛋白酶。 問(wèn)題是，如果這幾個(gè)pH都不是酶活的最適pH，同一溫度條件40℃下不同酶之間測(cè)出來(lái)的活力有可比性嗎？ 比如兩種蛋白酶的活力都是20萬(wàn)，那如果取相同單位的酶同一條件下水解蛋白，結(jié)果會(huì)一樣嗎？ 我覺得國(guó)標(biāo)測(cè)定酶活的方法，只適合同一種酶的測(cè)定，不一樣的酶是沒(méi)有可比性的。 所以，諾維信等廠家才會(huì)用自己測(cè)定酶活的方法和不同酶活單位來(lái)標(biāo)注不同的酶，對(duì)不對(duì)？ 那我現(xiàn)在比較幾種蛋白酶的酶解效果，按照統(tǒng)一的酶活力單位來(lái)添加的話，是不是根本沒(méi)有意義？ |
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3樓2012-04-25 11:10:04
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| 其實(shí)，酶活檢測(cè)僅僅是對(duì)酶活大小的初步判定，主要還是要看其對(duì)應(yīng)用底物（不一定是酪蛋白）的酶解效果，通過(guò)酶解產(chǎn)物的監(jiān)測(cè)比酶活檢測(cè)更準(zhǔn)確，當(dāng)然還要摸索適合的酶解條件了；如果兩種蛋白酶的活力都是20萬(wàn)，那如果取相同單位的酶同一條件下水解蛋白，結(jié)果可能不一樣，每種酶都有它的最適底物和條件；那我現(xiàn)在比較幾種蛋白酶的酶解效果，按照統(tǒng)一的酶活力單位來(lái)添加的話，不一定沒(méi)有意義，它只是作為一個(gè)初篩的標(biāo)準(zhǔn)，而且要根據(jù)你用的幾種蛋白酶的最適條件（酸、中、堿性）去酶解，去監(jiān)測(cè)產(chǎn)物，再去考慮酶加量、底物量、酶解時(shí)間、溫度和pH。 |
5樓2012-04-26 13:12:01
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