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fly12365銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
T4l連接問題!
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目前,T4連接遇到問題,老連不上,體系如下: T4 1μL PBI101-GFP 2μL(濃度10ng/μL) 片段 6μL(濃度50ng/μL) 10x Buffer 1μL 12℃ 過夜,感受態(tài)JM109 正常, 請大蝦們幫助,卡在這了,五個基因一個也沒構(gòu)成,急死了! Sample Text |
銅蟲 (初入文壇)
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
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嗯............ 最好先驗證下T4是否還好,T4的Buffer中含有的ATP很容易在凍融過程中降解導致連接失敗,所以T4的Buffer都是推薦分裝使用,并且在冰上化融的,請樓主注意哦 你可以先拿個已知質(zhì)粒做酶切后,用T4連接看是否可行,若能夠連接的話,問題就不是你的T4上咯,應(yīng)該是你的片段切口和質(zhì)粒切口對不上的 祝實驗順利 若有說錯請高手指點哦 |

銀蟲 (小有名氣)
銅蟲 (初入文壇)
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