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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » T4l連接問題！！
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fly12365銅蟲 (初入文壇)
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T4l連接問題！！
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目前，T4連接遇到問題，老連不上，體系如下： T4 1μL PBI101-GFP 2μL(濃度10ng/μL) 片段 6μL(濃度50ng/μL) 10x Buffer 1μL 12℃ 過夜，感受態(tài)JM109 正常， 請大蝦們幫助，卡在這了，五個基因一個也沒構成，急死了！！ Sample Text |
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atlanticwi
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嗯............ 最好先驗證下T4是否還好，T4的Buffer中含有的ATP很容易在凍融過程中降解導致連接失敗，所以T4的Buffer都是推薦分裝使用，并且在冰上化融的，請樓主注意哦 你可以先拿個已知質粒做酶切后，用T4連接看是否可行，若能夠連接的話，問題就不是你的T4上咯，應該是你的片段切口和質粒切口對不上的 祝實驗順利 若有說錯請高手指點哦  |
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fly12365
2樓2012-04-30 23:40:03
快樂由自己go
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5樓2012-05-01 08:39:09
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6樓2012-05-02 10:29:03
jingdejun
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9樓2012-05-03 10:19:26
10樓2012-08-30 22:21:37
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