 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2246 | 回復(fù): 13 | ||
emma立夏鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
雙酶切連TA后切不開
|
|
|
各位大俠，這里看~~~ 一、我的目的片段已經(jīng)與pMD-18Tsimple vector連接上之后，挑菌落pcr有目的條帶呈陽性。 二、然后提質(zhì)粒之后做雙酶切�？墒菂s切不開。用的是EcoR l 和Sal l兩種酶，我做的是20ul體系，反應(yīng)3h，37°c，水浴。 三、電泳結(jié)果，與未酶切的質(zhì)粒條帶做對比，條帶跑到后面，EcoR l 單酶切了，但是Sal l與沒有酶切組相同。 我考慮的問題： 因?yàn)槲业膒cr引物自加上了這兩種酶切位點(diǎn)，但是當(dāng)時(shí)沒有考慮到保護(hù)堿基的特異性，都只是在酶切位點(diǎn)后加了一個(gè)A。是不是這個(gè)引物設(shè)計(jì)的時(shí)候出現(xiàn)問題了？ PS：酶活應(yīng)該是沒有問題的，因?yàn)橛脕砬羞^實(shí)驗(yàn)室的其他載體，能切開的。 現(xiàn)在想要擴(kuò)增這個(gè)片段，然后插入表達(dá)載體，但是一直切不開，很痛苦，做了一個(gè)多月了。大家請幫幫忙，八仙過海各顯神通~~~本人不勝感激~！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
293求調(diào)劑
已經(jīng)有14人回復(fù)
-
0703化學(xué)336分求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
304求調(diào)劑
已經(jīng)有9人回復(fù)
-
281求調(diào)劑（0805）
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
環(huán)境領(lǐng)域全國重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室招收博士1-2名
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
材料專碩306英一數(shù)二
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
302求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
26博士申請
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 關(guān)于xba I單酶切后的TA連接
已經(jīng)有7人回復(fù)
- DNA雙酶切后在兩端加adapter的連接問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 將質(zhì)粒上緊挨著的兩個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 雙酶切，體系，切不出來
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 雙酶切的片段不見了？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切求助
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 雙酶切后目的條帶下出現(xiàn)多個(gè)條帶的原因
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切連接不上的問題！謝謝！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切質(zhì)粒后，目的條帶淺且前方有模糊亮帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
huguangdong
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 68 (初中生)
- 金幣: 10532.4
- 散金: 858
- 紅花: 102
- 帖子: 4271
- 在線: 1581.2小時(shí)
- 蟲號: 1009663
- 注冊: 2010-05-01
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
emma立夏8樓2012-05-03 09:50:41
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
看天: 金幣+3, 鼓勵(lì)回答 2012-05-01 12:10:40
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
看天: 金幣+3, 鼓勵(lì)回答 2012-05-01 12:10:40
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2012-05-01 11:43:53
emma立夏
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 20
- 帖子: 36
- 在線: 10小時(shí)
- 蟲號: 1314207
- 注冊: 2011-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2012-05-01 14:01:12
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2012-05-01 15:22:26
世外清風(fēng)
鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 63 (初中生)
- 貴賓: 0.082
- 金幣: 8956.3
- 散金: 1169
- 紅花: 12
- 帖子: 3145
- 在線: 873.9小時(shí)
- 蟲號: 714541
- 注冊: 2009-03-04
- 性別: GG
- 專業(yè): 動(dòng)物遺傳學(xué)
5樓2012-05-02 08:23:32
mhmtf
銅蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 5 (幼兒園)
- 金幣: 380.5
- 帖子: 117
- 在線: 29.8小時(shí)
- 蟲號: 1245447
- 注冊: 2011-03-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2012-05-02 10:40:58
post_ngao
木蟲 (正式寫手)
科研宅
- BioEPI: 1
- 應(yīng)助: 14 (小學(xué)生)
- 金幣: 6362.9
- 紅花: 1
- 帖子: 320
- 在線: 61.8小時(shí)
- 蟲號: 1692067
- 注冊: 2012-03-15
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物無機(jī)化學(xué)
7樓2012-05-02 20:14:59
duowan17
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 3266.1
- 紅花: 1
- 帖子: 458
- 在線: 55.7小時(shí)
- 蟲號: 1760242
- 注冊: 2012-04-17
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
9樓2012-05-03 12:33:27
qianyr2008
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 34.5
- 帖子: 17
- 在線: 3.8小時(shí)
- 蟲號: 624162
- 注冊: 2008-10-12
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
10樓2012-05-03 13:11:34
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 emma立夏 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 277調(diào)劑 +5 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +4 | knight344 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 308求調(diào)劑 +4 | 是Lupa啊 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)工程321分求調(diào)劑 +11 | 大米飯！ 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑0856材料化工 +13 | z2839474511 2026-03-11 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0854可跨調(diào)劑，一作一項(xiàng)核心論文五項(xiàng)專利，省、國級證書40+數(shù)一英一287 +3 | 小李0854 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +6 | 大可digkids 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600調(diào)劑 +5 | 漾漾123sun 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學(xué)學(xué)碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 285求調(diào)劑 +6 | ytter 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考博] 東華理工大學(xué)化材專業(yè)26屆碩士博士申請 +6 | zlingli 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料工程327求調(diào)劑 +3 | xiaohe12w 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[基金申請] 現(xiàn)在如何回避去年的某一個(gè)專家，不知道名字 +3 | zk200107 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中科院，化學(xué)方向，295求調(diào)劑 +4 | 一氧二氮 2026-03-11 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求材料調(diào)劑 +5 | 隔壁陳先生 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 崔wj 2026-03-12 | 4/200 |
|