 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2277 | 回復(fù): 13 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
emma立夏鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
雙酶切連TA后切不開
|
|
|
各位大俠，這里看~~~ 一、我的目的片段已經(jīng)與pMD-18Tsimple vector連接上之后，挑菌落pcr有目的條帶呈陽性。 二、然后提質(zhì)粒之后做雙酶切�？墒菂s切不開。用的是EcoR l 和Sal l兩種酶，我做的是20ul體系，反應(yīng)3h，37°c，水浴。 三、電泳結(jié)果，與未酶切的質(zhì)粒條帶做對(duì)比，條帶跑到后面，EcoR l 單酶切了，但是Sal l與沒有酶切組相同。 我考慮的問題： 因?yàn)槲业膒cr引物自加上了這兩種酶切位點(diǎn)，但是當(dāng)時(shí)沒有考慮到保護(hù)堿基的特異性，都只是在酶切位點(diǎn)后加了一個(gè)A。是不是這個(gè)引物設(shè)計(jì)的時(shí)候出現(xiàn)問題了？ PS：酶活應(yīng)該是沒有問題的，因?yàn)橛脕砬羞^實(shí)驗(yàn)室的其他載體，能切開的。 現(xiàn)在想要擴(kuò)增這個(gè)片段，然后插入表達(dá)載體，但是一直切不開，很痛苦，做了一個(gè)多月了。大家請(qǐng)幫幫忙，八仙過海各顯神通~~~本人不勝感激~！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
309求調(diào)劑
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
一志愿南航 335分 | 0856 | GPA 4.07 | 有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有8人回復(fù)
-
求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
求化學(xué)調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
085600，材料與化工321分求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
-
0703 化學(xué) 求調(diào)劑，一志愿山東大學(xué) 342 分
已經(jīng)有5人回復(fù)
-
一志愿南開大學(xué)0710生物學(xué)359求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
材料與化工272求調(diào)劑
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
290求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于xba I單酶切后的TA連接
已經(jīng)有7人回復(fù)
- DNA雙酶切后在兩端加adapter的連接問題
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 將質(zhì)粒上緊挨著的兩個(gè)酶切位點(diǎn)進(jìn)行雙酶切后連接外源基因片段，是不是不好連接？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 雙酶切，體系，切不出來
已經(jīng)有10人回復(fù)
- 雙酶切的片段不見了？
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切求助
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 雙酶切后目的條帶下出現(xiàn)多個(gè)條帶的原因
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切連接不上的問題！謝謝！
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】雙酶切質(zhì)粒后，目的條帶淺且前方有模糊亮帶
已經(jīng)有12人回復(fù)
huguangdong
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- BioEPI: 3
- 應(yīng)助: 68 (初中生)
- 金幣: 10532.4
- 散金: 858
- 紅花: 102
- 帖子: 4271
- 在線: 1581.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 1009663
- 注冊(cè): 2010-05-01
- 專業(yè): 畜牧學(xué)
emma立夏8樓2012-05-03 09:50:41
★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
看天: 金幣+3, 鼓勵(lì)回答 2012-05-01 12:10:40
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
看天: 金幣+3, 鼓勵(lì)回答 2012-05-01 12:10:40
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
2樓2012-05-01 11:43:53
emma立夏
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 20
- 帖子: 36
- 在線: 10小時(shí)
- 蟲號(hào): 1314207
- 注冊(cè): 2011-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2012-05-01 14:01:12
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2012-05-01 15:22:26
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +8 | 誰不是少年 2026-03-29 | 8/400 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600，專業(yè)課化工原理，320分求調(diào)劑 +4 | 大饞小子 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +10 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料專碩調(diào)劑 +5 | 椰椰。 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
[考研] 334分 一志愿武理 材料求調(diào)劑 +7 | 李李不服輸 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 崔wj 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085701求調(diào)劑初試286分 +4 | secret0328 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +7 | 爭(zhēng)取九點(diǎn)睡 2026-03-28 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +7 | 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 266分，求材料冶金能源化工等調(diào)劑 +7 | 哇呼哼呼哼 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 安徽大學(xué)專碩生物與醫(yī)藥專業(yè)(086000)324分，英語已過四六級(jí)，六級(jí)521，求調(diào)劑 +4 | 美味可樂雞翅 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 +10 | A-哆啦Z夢(mèng) 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 085601 材料工程 313分 求調(diào)劑 +5 | Ong3 2026-03-27 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +3 | 1294608413 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[有機(jī)交流]
 有機(jī)合成求助
 20+3
|
FENGSHUJEI 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 333求調(diào)劑 +3 | ALULU4408 2026-03-23 | 3/150 |
|