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[交流]
食物的排鉛實(shí)驗(yàn)如何作?
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如題:想分析一種食物是否具有排鉛功能,該如何設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)?除動(dòng)物實(shí)驗(yàn)外,可有公認(rèn)的方法?多謝交流! [ Last edited by lovibond on 2012-5-10 at 15:45 ] |
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藥監(jiān)局2012年4月發(fā)布了國食藥監(jiān)保化[2012]107號文件“關(guān)于印發(fā)抗氧化功能評價(jià)方法等9個(gè)保健功能評價(jià)方法的通知”,以后評價(jià)方法就采用這個(gè)了。請參考。 促進(jìn)排鉛功能評價(jià)方法 試驗(yàn)項(xiàng)目、試驗(yàn)原則及結(jié)果判定 Items, Principles and Result Assessment 1 試驗(yàn)項(xiàng)目 1.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 1.1.1 體重 1.1.2 血鉛 1.1.3 骨鉛 1.1.4 肝組織鉛 1.2 人體試食試驗(yàn) 1.2.1 血鉛 1.2.2 尿鉛 1.2.3 尿鈣 1.2.4 尿鋅 2 試驗(yàn)原則 2.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。 2.2 應(yīng)對臨床癥狀、體征進(jìn)行觀察。 2.3 應(yīng)對尿鉛進(jìn)行多次測定,以了解體內(nèi)鉛的排出情況。 2.4 在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí),應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。 3 結(jié)果判定 3.1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):實(shí)驗(yàn)組與模型對照組比較,骨鉛含量顯著降低,同時(shí)血鉛或肝鉛顯著降低,可判定該受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。 3.2 人體試食試驗(yàn):試食組與對照組組間比較,至少兩個(gè)觀察時(shí)點(diǎn)尿鉛排出量增加且顯著高于試驗(yàn)前,或總尿鉛排出量明顯增加。同時(shí),對總尿鈣、總尿鋅的排出無明顯影響,或總尿鈣、總尿鋅排出增加的幅度小于總尿鉛排出增加的幅度,可判定該受試樣品具有促進(jìn)排鉛功能。 促進(jìn)排鉛功能檢驗(yàn)方法 Method for the Assessment of Alleviating Lead Excretion Function 1 動(dòng)物實(shí)驗(yàn) 1.1 實(shí)驗(yàn)原理 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物經(jīng)口給予含鉛化合物(推薦使用醋酸鉛),可造成組織中鉛含量增高。造模早期以肝、腎等組織中增高明顯,之后骨組織中鉛含量逐漸增高。比較給予實(shí)驗(yàn)動(dòng)物受試樣品后,模型動(dòng)物組織中鉛含量的變化情況,以確定此受試樣品是否具有促進(jìn)機(jī)體排鉛的作用。 1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 推薦使用成年大鼠,單一性別,體重150-200克,每組8-12只。小鼠則應(yīng)使用近交系動(dòng)物,單一性別,體重18-22克,每組10-15只。 1.3劑量分組及受試樣品給予時(shí)間 實(shí)驗(yàn)設(shè)三個(gè)劑量組、一個(gè)空白對照組和一個(gè)模型對照組,三個(gè)劑量組中應(yīng)包括一個(gè)人體推薦量的10倍(小鼠)或5倍(大鼠)劑量組。受試樣品給予時(shí)間30天,必要時(shí)可延長至45天。 1.4 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 本實(shí)驗(yàn)使用預(yù)防性高鉛動(dòng)物模型。 實(shí)驗(yàn)期間,在模型對照組、受試樣品各劑量組飲用醋酸鉛水溶液(推薦濃度為0.1%-0.2%)或喂飼含鉛飼料造模的同時(shí),各劑量組灌胃給予受試樣品或喂飼含不同劑量受試樣品的飼料?瞻讓φ战M給予去離子水或基礎(chǔ)飼料。 1.5 觀察指標(biāo) 于末次給予動(dòng)物受試樣品24小時(shí)后,稱量動(dòng)物體重。取血并處死動(dòng)物,取適量血、肝、股骨樣品進(jìn)行濕式消化,使用石墨爐原子吸收分光光度計(jì)(或ICP-MS等方法)測定鉛含量。 1.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定 一般采用方差分析,但需先進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),方差齊,則計(jì)算F值。若F值< F0.05,結(jié)論為各組均數(shù)間差異無顯著性;若F值≥F0.05(即P≤0.05),結(jié)論為各組均數(shù)間差異有顯著性,需進(jìn)一步使用多個(gè)實(shí)驗(yàn)組和一個(gè)對照組間均數(shù)的兩兩比較方法進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后,用轉(zhuǎn)換后的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析;若經(jīng)變量轉(zhuǎn)換仍不能達(dá)到正態(tài)分布或方差齊的目的,則改用秩和檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果判定:在動(dòng)物模型成立的前提下,實(shí)驗(yàn)組與模型對照組比較,骨鉛含量顯著降低,同時(shí)血鉛或肝鉛顯著降低,可判定該受試樣品動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果為陽性。 2 人體試食試驗(yàn) 2.1 受試者納入標(biāo)準(zhǔn) 有密切鉛接觸史,血鉛含量較高的自愿受試者。推薦選擇屬于血鉛負(fù)荷偏高的人群,即血鉛在200g/L-400g/L(1mol/L-2mol/L)范圍內(nèi),或尿鉛在70g/L-120g/L(0.34mol/L -0.58mol/L)范圍內(nèi)者。 2.2 受試者排除標(biāo)準(zhǔn) 2.2.1 血鉛或尿鉛過高,有明顯鉛中毒癥狀者。 2.2.2 患有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等全身性疾病者。 2.2.3 妊娠和哺乳期婦女。 2.2.4 試驗(yàn)期間服用與受試功能有關(guān)的物品,影響到對結(jié)果的判斷者。 2.2.5 停服受試樣品或中途加服其它藥物,無法判斷功效或資料不全者。 2.3. 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及分組要求 采用自身和組間兩種對照設(shè)計(jì)。按血鉛或尿鉛水平對受試者進(jìn)行隨機(jī)分組,在分組時(shí)盡可能考慮影響結(jié)果的主要因素如鉛接觸史、年齡、性別等,進(jìn)行均衡性檢驗(yàn),以保證組間的可比性。每組受試者有效例數(shù)不少于50例。 2.4.受試樣品的劑量和使用方法 試食組按推薦服用方法和服用量每日服用受試樣品,對照組可服用安慰劑或采用空白對照。受試樣品給予時(shí)間30天,必要時(shí)可延長至45天。試驗(yàn)期間受試者不改變生活、工作環(huán)境,不改變原來生活、飲食習(xí)慣。 2.5.觀察指標(biāo) 2.5.1 安全性指標(biāo) 2.5.1.1 一般狀況(包括精神、睡眠、飲食、大小便、血壓等)。 2.5.1.2 血、尿、便常規(guī)檢查。 2.5.1.3 肝、腎功能檢查。 2.5.1.4 胸透、心電圖、腹部B超檢查(各項(xiàng)指標(biāo)于試驗(yàn)前檢查一次)。 2.5.1.5 尿鈣、尿鋅的測定:測定時(shí)間、次數(shù)和方法同尿鉛?偰蜮}、總尿鋅為試驗(yàn)開始后3次尿鈣或尿鋅測定值之和。 2.5.2 功效性指標(biāo): 2.5.2.1 臨床癥狀觀察:準(zhǔn)確記錄受試者試食前后的主觀癥狀,主要觀察頭暈、失眠、四肢無力等癥狀。 2.5.2.2 血鉛、尿鉛含量測定:采集試食試驗(yàn)前、試驗(yàn)后血液,以及試食前及試食第10天(如進(jìn)行45天試驗(yàn)則為第15天)、20天(如進(jìn)行45天試驗(yàn)則為第30天)和結(jié)束時(shí)的24小時(shí)尿液樣本(亦可以晨尿代替24小時(shí)尿,但需用尿肌酐進(jìn)行校正),測定血鉛、尿鉛含量?偰蜚U為試驗(yàn)開始后三次尿鉛測定值之和。 2.6 數(shù)據(jù)處理和結(jié)果判定 血鉛、尿鉛、尿鈣、尿鋅等試驗(yàn)數(shù)據(jù)為計(jì)量資料,可用t檢驗(yàn)進(jìn)行分析。自身對照資料可采用配對t檢驗(yàn);試食后不同觀察時(shí)點(diǎn)兩組血鉛、尿鉛的測定值均數(shù)比較以及試食后兩組總尿鉛、總尿鈣、總尿鋅排出量比較采用兩樣本均數(shù)t檢驗(yàn)。后者需進(jìn)行方差齊性檢驗(yàn),對非正態(tài)分布或方差不齊的數(shù)據(jù)需進(jìn)行適當(dāng)?shù)淖兞哭D(zhuǎn)換,待滿足正態(tài)分布或方差齊的要求后,用轉(zhuǎn)換的數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn);若經(jīng)數(shù)據(jù)轉(zhuǎn)換仍不能滿足正態(tài)分布或方差齊要求,則改用t’檢驗(yàn)或秩和檢驗(yàn)。對于變異系數(shù)太大(如CV>50%)的資料,應(yīng)使用秩和檢驗(yàn)。 結(jié)果判定:試食后,試食組與對照組組間比較,至少兩個(gè)觀察時(shí)點(diǎn)尿鉛排出量增加且顯著高于試驗(yàn)前,或總尿鉛排出量明顯增加。同時(shí),對總尿鈣、總尿鋅的排出無明顯影響,或總尿鈣、總尿鋅排出增加的幅度小于總尿鉛排出增加的幅度,可判定該受試樣品具有促進(jìn)排鉛功能。 |
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試驗(yàn)項(xiàng)目 動(dòng)物實(shí)驗(yàn): 1體重 2血鉛 3 骨鉛 4肝組織鉛 人體試食試驗(yàn): 1血鉛 2尿鉛 3 尿鈣 4尿鋅 試驗(yàn)原則: 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體試食試驗(yàn)所列指標(biāo)均為必做項(xiàng)目。 根據(jù)受試樣品作用原理的不同,預(yù)防性高鉛動(dòng)物模型和治療性高鉛動(dòng)物模型選其一進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。 應(yīng)對臨床癥狀、體征進(jìn)行觀察。 對尿鉛進(jìn)行多次測定,以了解體內(nèi)鉛的排出情況。 在進(jìn)行人體試食試驗(yàn)時(shí),應(yīng)對受試樣品的食用安全性作進(jìn)一步的觀察。 結(jié)果判定 動(dòng)物實(shí)驗(yàn):骨鉛和肝組織鉛任一指標(biāo)明顯降低,可判定該受試樣品促進(jìn)排鉛功能動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽性。 人體試食試驗(yàn):任一觀察時(shí)點(diǎn)尿鉛排出量或總尿鉛排出量明顯增加并對總尿鈣、總尿鋅的排出無明顯影響,或總尿鈣、總尿鋅排出增加的幅度小于總尿鉛排出增加的幅度,可判定 該受試樣品具有促進(jìn)排鉛功能的作用。 |


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