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劉雨999新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
BamH1酶切不充分
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大家好，我的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)在遇到一個(gè)難題，想不通，質(zhì)粒里面只有一個(gè)BamH1酶切位點(diǎn)BamH1是插入一段序列引入的一個(gè)位點(diǎn)，本來(lái)想著再利用BamH1和Xho1雙酶切再引入一個(gè)長(zhǎng)一點(diǎn)的片段，可是自連接長(zhǎng)菌較多，后來(lái)對(duì)質(zhì)粒分別做了BamH1和Xho1的單酶切鑒定，得到圖1中所示:1、2不同菌落所提的質(zhì)粒，3、4是1、2質(zhì)粒分別BamH1單酶切，5、6是Xho1單酶切。圖2是插入帶有BamH1片段前后的質(zhì)粒做Xho1單酶切對(duì)照。 大家?guī)臀曳治鲆幌率敲盖胁怀浞謫�？酶沒(méi)有問(wèn)題，做其他的質(zhì)粒單酶切能切開(kāi)。而且看圖2應(yīng)該是帶有BamH1的片段插入進(jìn)去了。 我感覺(jué)目前最好的方法是測(cè)序，但是我跟導(dǎo)師提了幾次測(cè)序，她都不同意；我又猜想是不是甲基化了，但是導(dǎo)師說(shuō)同是用TOP10提的質(zhì)粒，別的都沒(méi)有甲基化問(wèn)題，所以把這個(gè)原因也排除了。我現(xiàn)在不知道問(wèn)題出在哪？ 圖片1 圖片2 |
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劉雨999
新蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 7
- 帖子: 6
- 在線: 59分鐘
- 蟲(chóng)號(hào): 1801460
- 注冊(cè): 2012-05-07
2樓2012-05-07 19:59:47
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