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雨玫天晴新蟲 (小有名氣)
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[求助]
組織塊貼壁法培養(yǎng)細(xì)胞如何做?
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各位各位這里瞧下下哈,我是個(gè)菜鳥級(jí)別的,問一下菜鳥問題哦~那個(gè)組織塊貼壁培養(yǎng)細(xì)胞具體是個(gè)啥子過程嘞?細(xì)胞不純的話,怎么消化怎么傳代啊?謝謝各位咯*^_^* [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |

新蟲 (小有名氣)

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很久以前做的,做法如下: 實(shí)驗(yàn)所要用的工具都應(yīng)滅菌消毒。首先,在實(shí)驗(yàn)前24h于60×15mm的培養(yǎng)皿內(nèi)鋪上血清,將鋪有血清的培養(yǎng)皿放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)。。。。。。組織取出,用PBS將其沖洗干凈。將組織切割成1mm3左右的小塊。在剪切過程中,可以適當(dāng)?shù)南蚪M織上滴1~2滴培養(yǎng)液,以保持濕潤(rùn)。然后,將剪切好的組織塊用眼科鑷均勻鋪于事先準(zhǔn)備好的培養(yǎng)皿內(nèi),加入少量含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,以組織塊不在培養(yǎng)液內(nèi)漂浮為宜,然后把培養(yǎng)皿放置在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)。放置2~4h后待組織小塊貼附于培養(yǎng)皿,加入含20%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液,在37℃含5%的CO2的條件下培養(yǎng),待1~2天后細(xì)胞由組織中游出,摘掉組織塊并用PBS清洗培養(yǎng)皿去除死細(xì)胞和組織殘留物,加入培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。待培養(yǎng)皿中的細(xì)胞長(zhǎng)滿后用胰蛋白酶將其消化下來(lái),轉(zhuǎn)入50ml的塑料培養(yǎng)瓶中培養(yǎng),此時(shí)的細(xì)胞我們稱其為原代。。。。細(xì)胞。 至于純化,我做的是肺的,細(xì)胞相對(duì)含量不復(fù)雜,我要的細(xì)胞含量很高,所以穿幾代,就純化得差不多了。 要是肝的,那就不好做了。。。。。 |


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