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原代心肌細(xì)胞培養(yǎng) 已有5人參與
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我目前正在做原代心肌細(xì)胞培養(yǎng),但結(jié)果不太理想,死細(xì)胞特別多,貼壁細(xì)胞很少,并且觀察不到搏動(dòng)。現(xiàn)將整個(gè)造作流程寫(xiě)出,請(qǐng)求做原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)成功的大師們給點(diǎn)建議:培養(yǎng)液為含10%血清(BI)及1%雙抗的DMEM高糖,胰酶為碧云天的濃度0.25%含0.02%EDTA。 KM乳鼠75%酒精消毒后取心于預(yù)冷的培養(yǎng)液中,清洗血管及纖維組織后轉(zhuǎn)移到另一遇冷的培養(yǎng)液中,將心臟剪碎,每顆心剪成2-3塊,吸至15ml離心管,胰酶清洗,上清液棄去,之后加組織塊2倍體積的胰酶,37度水浴消化20s,取上清用培養(yǎng)液終止消化,反復(fù)操作,直至組織塊消化完全。200目濾網(wǎng)3層過(guò)濾,1500轉(zhuǎn),離心5min,制成細(xì)胞懸液,種到培養(yǎng)瓶中,90min后分離心肌與成纖維。 請(qǐng)問(wèn)該過(guò)程哪里有問(wèn)題嗎?細(xì)胞為什么不活? |
新蟲(chóng) (小有名氣)

| 乳鼠取1-3d的,只取心尖部分,剪成0.5-1mm3大小。0.25%胰酶先軟化5分鐘,棄上清;0.08%胰酶消化(4-6mL)8min,消化7-8次(消化時(shí)放在培養(yǎng)箱里面封口消化,每2min拿出來(lái)震搖一下),收集每次上清(先輕微吹打10到15次),加入等體積的DMEM終止消化。1000轉(zhuǎn),離心8分鐘,200目過(guò)濾后,接種到培養(yǎng)瓶中,差速貼壁2h.你試試。 |
金蟲(chóng) (小有名氣)
新蟲(chóng) (初入文壇)
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