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原代心肌細(xì)胞培養(yǎng) 已有5人參與
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我目前正在做原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)，但結(jié)果不太理想，死細(xì)胞特別多，貼壁細(xì)胞很少，并且觀察不到搏動(dòng)。現(xiàn)將整個(gè)造作流程寫出，請求做原代心肌細(xì)胞培養(yǎng)成功的大師們給點(diǎn)建議：培養(yǎng)液為含10%血清（BI）及1%雙抗的DMEM高糖，胰酶為碧云天的濃度0.25%含0.02%EDTA。 KM乳鼠75%酒精消毒后取心于預(yù)冷的培養(yǎng)液中，清洗血管及纖維組織后轉(zhuǎn)移到另一遇冷的培養(yǎng)液中，將心臟剪碎，每顆心剪成2-3塊，吸至15ml離心管，胰酶清洗，上清液棄去，之后加組織塊2倍體積的胰酶，37度水浴消化20s，取上清用培養(yǎng)液終止消化，反復(fù)操作，直至組織塊消化完全。200目濾網(wǎng)3層過濾，1500轉(zhuǎn)，離心5min，制成細(xì)胞懸液，種到培養(yǎng)瓶中，90min后分離心肌與成纖維。 請問該過程哪里有問題嗎？細(xì)胞為什么不活？ |
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windbells636
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9樓2014-04-15 09:58:48
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
gyesang: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流！ 2014-03-25 22:26:37
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| 乳鼠取1-3d的，只取心尖部分，剪成0.5-1mm3大小。0.25%胰酶先軟化5分鐘，棄上清；0.08%胰酶消化（4-6mL)8min,消化7-8次(消化時(shí)放在培養(yǎng)箱里面封口消化，每2min拿出來震搖一下），收集每次上清（先輕微吹打10到15次），加入等體積的DMEM終止消化。1000轉(zhuǎn)，離心8分鐘，200目過濾后，接種到培養(yǎng)瓶中，差速貼壁2h.你試試。 |
2樓2014-03-25 20:50:25
3樓2014-03-27 09:13:44
chenxiangfan
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4樓2014-03-27 09:18:44
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