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hucuiyao新蟲 (小有名氣)
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[交流]
菌液PCR問(wèn)題 已有10人參與
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| 我做菌液PCR，同學(xué)說(shuō)出來(lái)的都是引物二聚體，這是怎么回事呢？ |
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9樓2012-05-11 09:11:20
xzx018
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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2樓2012-05-09 15:06:12
4樓2012-05-09 16:23:06
超然渡陳
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西瓜: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 19:11:47
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西瓜: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2012-05-09 19:11:47
| 樓主應(yīng)該是用菌液PCR做快速鑒定轉(zhuǎn)化后的陽(yáng)性克隆吧？所用的引物是你之前克隆基因的引物，還是載體上的通用引物？要把具體情況說(shuō)清楚而且最好要帶圖的。假如用的是克隆基因時(shí)的引物，做菌落PCR或者菌液PCR沒(méi)有目的條帶而出現(xiàn)引物二聚體可以大概說(shuō)明是假陽(yáng)性。要是用的通用引物或者其它新的引物，可能是你退火溫度沒(méi)選好或者其它一些原因，但是不能肯定是假陽(yáng)性。另外需要說(shuō)明的是做酵母菌落或者菌液PCR要提前煮沸，因?yàn)榻湍赣屑?xì)胞壁，預(yù)變性和變性不能使壁完全破碎，而一般的細(xì)菌就不用預(yù)先煮沸。 |
5樓2012-05-09 17:10:37
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