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[求助]
植物組織培養(yǎng)方面的實驗操作經(jīng)驗總結(jié)
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| 各位親們好，剛開始接觸植物組織培養(yǎng)這方面的實驗，實驗操作中許多需要注意的事項還不是很清楚，希望能夠得到大家的幫助，減少實驗污染。 |
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 【分子生物】EPI帖 | 組培 |
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xiaoxiong520
銀蟲 (初入文壇)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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初代培養(yǎng)： 1、外植體的選擇及消毒： 幼年組織比老年組織具有較高的行態(tài)發(fā)生能力。外植體的大小莖段長0.5cm，葉片面積5mm2。 把材料切割成適當大小，即滅菌容器能放入為宜。在超凈臺用70％酒精消毒10-30s；用殺菌劑0.1%升汞處理5-20 min； 用無菌水涮洗幾次，每次不少于3min，以盡量去除殘毒。 2、無菌操作 ⑴ 超凈工作臺滅菌 開始無菌操作前半小時，打開超凈工作臺上的紫外燈，照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，使超凈工作臺正常送風，10分鐘左右后，即可開始無菌操作。 ⑵ 雙手及接種器械滅菌 進行無菌操作前，先用肥皂洗滌雙手，穿好工作服。用70％～75％的酒精擦拭臺面并消毒雙手。所有接種器械用75％酒精浸泡，在酒精燈上灼燒滅菌。 ⑶ 接種 切去材料兩端各0.5cm左右長度莖段，將莖段接種到初代培養(yǎng)基上。在培養(yǎng)容器上標明培養(yǎng)基代號和接種日期。 3、污染的原因及對策 污染：組培過程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌導致培養(yǎng)失敗現(xiàn)象。 （1）污染的原因 外植體帶菌，培養(yǎng)基滅菌不徹底，操作員不遵守操作規(guī)程等。細菌污染 在接種后1-2天可發(fā)現(xiàn)，菌斑呈粘液狀。 真菌污染 在接種3天后可發(fā)現(xiàn)，污染部分長有不同顏色的霉菌。 （2）污染的預(yù)防措施 將取的枝條用水沖干凈后插入自來水中使其抽枝，用新抽的枝作外植體。 晴天中午到下午采樣； 操作人員嚴格遵守操作規(guī)程接種； 培養(yǎng)基及其用具滅菌要徹底。 |
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5樓2012-05-10 09:53:16
starseacow
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4樓2012-05-10 09:42:15
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6樓2012-05-10 14:16:47
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7樓2012-05-10 14:19:07
robocop
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8樓2012-06-05 21:10:37
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