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植物組織培養(yǎng)方面的實(shí)驗(yàn)操作經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
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| 各位親們好，剛開始接觸植物組織培養(yǎng)這方面的實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)操作中許多需要注意的事項(xiàng)還不是很清楚，希望能夠得到大家的幫助，減少實(shí)驗(yàn)污染。 |
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 【分子生物】EPI帖 | 組培 |
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dfl204
鐵桿木蟲 (著名寫手)
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森林76314樓2012-05-10 09:42:15
starseacow
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2樓2012-05-09 17:42:49
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【答案】應(yīng)助回帖
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小丹木木: 金幣+3, MolEPI+1, 謝謝分享經(jīng)驗(yàn) 2012-05-10 11:29:21
森林7631: 金幣+2, ★★★★★最佳答案 2012-05-10 14:16:31
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初代培養(yǎng)： 1、外植體的選擇及消毒： 幼年組織比老年組織具有較高的行態(tài)發(fā)生能力。外植體的大小莖段長(zhǎng)0.5cm，葉片面積5mm2。 把材料切割成適當(dāng)大小，即滅菌容器能放入為宜。在超凈臺(tái)用70％酒精消毒10-30s；用殺菌劑0.1%升汞處理5-20 min； 用無(wú)菌水涮洗幾次，每次不少于3min，以盡量去除殘毒。 2、無(wú)菌操作 ⑴ 超凈工作臺(tái)滅菌 開始無(wú)菌操作前半小時(shí)，打開超凈工作臺(tái)上的紫外燈，照射20分鐘后，關(guān)閉紫外燈，使超凈工作臺(tái)正常送風(fēng)，10分鐘左右后，即可開始無(wú)菌操作。 ⑵ 雙手及接種器械滅菌 進(jìn)行無(wú)菌操作前，先用肥皂洗滌雙手，穿好工作服。用70％～75％的酒精擦拭臺(tái)面并消毒雙手。所有接種器械用75％酒精浸泡，在酒精燈上灼燒滅菌。 ⑶ 接種 切去材料兩端各0.5cm左右長(zhǎng)度莖段，將莖段接種到初代培養(yǎng)基上。在培養(yǎng)容器上標(biāo)明培養(yǎng)基代號(hào)和接種日期。 3、污染的原因及對(duì)策 污染：組培過(guò)程中培養(yǎng)基和培養(yǎng)材料滋生雜菌導(dǎo)致培養(yǎng)失敗現(xiàn)象。 （1）污染的原因 外植體帶菌，培養(yǎng)基滅菌不徹底，操作員不遵守操作規(guī)程等。細(xì)菌污染 在接種后1-2天可發(fā)現(xiàn)，菌斑呈粘液狀。 真菌污染 在接種3天后可發(fā)現(xiàn)，污染部分長(zhǎng)有不同顏色的霉菌。 （2）污染的預(yù)防措施 將取的枝條用水沖干凈后插入自來(lái)水中使其抽枝，用新抽的枝作外植體。 晴天中午到下午采樣； 操作人員嚴(yán)格遵守操作規(guī)程接種； 培養(yǎng)基及其用具滅菌要徹底。 |
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5樓2012-05-10 09:53:16
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