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rebornpro鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
PCR出現(xiàn)問題，求高人解答
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1、PCR的時候，本來是要加無菌水的，結(jié)果誤加了PBS，會不會有什么影響？會不會P不出來？ 2、提了幾個細(xì)菌的基因組之后，準(zhǔn)備將其稀釋做PCR的模版，一般都是用的無菌水稀釋，如果我用的是PBS，并在-20℃保存?zhèn)溆�。這樣處理之后，還能不能用來做后續(xù)的實驗（如PCR等）？ |
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孫啟亮
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小丹木木: 金幣+3, 專家考核, 專家還是很厲害的哦 2012-05-10 13:44:05
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小丹木木: 金幣+3, 專家考核, 專家還是很厲害的哦 2012-05-10 13:44:05
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首先你這種情況還真沒碰到過。PBS和無酶水的區(qū)別是多了幾種離子，鉀離子，鈉離子，氯離子等等。但是我記得這些離子不會對體系中酶的活性產(chǎn)生影響，倒是在對產(chǎn)物跑膠的時候會產(chǎn)生影響。其次，PBS的PH好像是在7.3左右，不知在此PH下會不會對酶活性有影響？！PH的影響可能是主要的。最后，由于你用的PBS應(yīng)該是普通的，不是無酶的，那么如果有雜質(zhì)的話可能也會產(chǎn)生影響。事實上PBS中是有雜質(zhì)的，因為根據(jù)經(jīng)驗，我們配的PBS長期存放后會有沉淀。 因為我沒遇到這種情況過，所以只能幫你分析，不能給你確定答案，個人建議樓主可以去嘗試做一下，看你做的結(jié)果之后再做決定，同時我再給你叫個專家過來 @atlanticwi |
rebornpro2樓2012-05-09 23:06:49
atlanticwi
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小丹木木: 金幣+2, 這個也是專家了 2012-05-10 13:44:25
小丹木木: 金幣+2, 這個也是專家了 2012-05-10 13:44:25
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嗯........................ 我不是專家啦 樓上專家解釋很清楚了 我個人感覺普通的Taq酶對體系及成分要求并不是特別嚴(yán)謹(jǐn) 我7uL體系（本應(yīng)該10uL的）P成功過 有人錯拿NaOH代替蒸餾水也P成功過 但是高保真系列酶我就說不上了................ 如果你做錯了 對于PCR這種需要反復(fù)嘗試的實驗 先將錯就錯做下去 出了看結(jié)果再說 其實我們都曾心里自己安慰自己：“說不定結(jié)果更好了呢” |
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3樓2012-05-09 23:16:20
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4樓2012-05-10 08:37:49
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5樓2012-05-10 08:38:04
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6樓2012-05-10 09:05:30
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