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[求助]
測小鼠中血藥濃度的幾個問題
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本人學(xué)化學(xué)的，對藥代動力學(xué)方面不是很了解，有幾個問題想請教大家： 1.用HPLC測血藥濃度，取1ml 全血后，加1%肝素鈉立即搖勻，離心3500轉(zhuǎn)/分，10分鐘，分離血漿。這個轉(zhuǎn)速和時間可以嗎？肝素鈉加多少？ 2.沉淀蛋白：取血漿0.5ml，加甲醇（血漿：甲醇=3：1），旋渦1min，4000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取上清液，于50℃水浴氮氣吹干，1mL超純水復(fù)溶，旋渦1 min。什么叫旋渦？如果不氮氣吹干，可否用其它方法？還有是否要復(fù)溶呢？ 3.準(zhǔn)備用液-液萃取：甲醇溶解上述上清液，（有機相：水相=2：1），高速離心，請上清于HPLC進樣測量。請問，除了甲醇還有別的溶劑可選擇嗎？我準(zhǔn)備預(yù)實驗時試一下。高速離心速度多少才合適，離心時間呢？ 4.我看還有個濃集的步驟，請問是怎么操作呢？ 5.這些操作，比如2中取血漿，用移液槍合適嗎，還是要用微量注射器，移液管之類的呢？ 問題有點多，請了解的大俠們指點指點。謝謝。 |
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2樓2012-05-11 13:00:05
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
豆哥: 金幣+1, 謝謝參與交流 2012-05-14 08:58:50
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問題一：轉(zhuǎn)速和時間合適，肝素鈉加入量的原則是：1ml的血液需要肝素0.1-0.2mg或者20IU（1mg相當(dāng)于126IU），具體看你使用的肝素的活性配制一定濃度的水溶液就可以，這個量不要求太準(zhǔn)確。 問題二：渦旋就是充分的混合，讓蛋白質(zhì)沉淀，讓你的藥物從蛋白質(zhì)中釋放出來。不用氮氣吹干，可以用真空旋轉(zhuǎn)蒸干，但是如果你的量很少的話，損失很嚴重，因此建議用氮氣吹干，氮氣又不貴。 問題三：液相流動相的選取是要參考你的目標(biāo)檢測物的，除了甲醇，還有乙腈等可以選擇，乙腈的效果一般比甲醇好些，但是具體問題具體分析。 問題四：藥物的濃縮富集有很多種方法，例如過柱子洗脫富集、蒸干溶劑富集等等，找到一種合適自己的，具體操作要看你選取什么樣的富集方法。 問題五：移液槍當(dāng)然操作起來比移液管之類的簡單而且，對于微升級別體積的溶液你能用移液管嗎？ 建議去圖書館找相關(guān)書籍看看 |
3樓2012-05-11 16:53:16
4樓2012-05-13 13:21:29
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5樓2012-06-01 16:31:47
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【答案】應(yīng)助回帖
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1.用HPLC測血藥濃度，現(xiàn)在管子中加10ul肝素，取0.3ml（太多老鼠要死了） 全血后，，離心8000轉(zhuǎn)/分，5分鐘，分離血漿。 2.沉淀蛋白：取血漿0.5ml，加甲醇（血漿：甲醇=3：1），旋渦1min，4000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取上清液，于50℃水浴氮氣吹干，1mL超純水復(fù)溶，旋渦1 min。什么叫旋渦（就是旋渦振蕩）？如果不氮氣吹干，可否用其它方法（空氣吹干）？還有是否要復(fù)溶呢（那干的你怎么進樣，下面你要液液萃取，豈能沒液）？ 3.準(zhǔn)備用液-液萃�。杭状既芙馍鲜錾锨逡�，（有機相：水相=2：1），高速離心，請上清于HPLC進樣測量。請問，除了甲醇還有別的溶劑可選擇嗎？我準(zhǔn)備預(yù)實驗時試一下。高速離心速度多少才合適，離心時間呢（20000or150000 10min）？ 4.我看還有個濃集的步驟，請問是怎么操作呢？ 5.這些操作，比如2中取血漿，用移液槍合適嗎（合適，200的），還是要用微量注射器，移液管之類的呢？ 問題有點多，請了解的大俠們指點指點。謝謝。 |
6樓2012-06-01 16:50:09
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7樓2012-06-02 09:29:51
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8樓2012-06-02 10:03:46
9樓2012-06-04 17:12:28
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