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vitc捐助貴賓 (小有名氣)
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[求助]
測(cè)小鼠中血藥濃度的幾個(gè)問(wèn)題
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本人學(xué)化學(xué)的，對(duì)藥代動(dòng)力學(xué)方面不是很了解，有幾個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教大家： 1.用HPLC測(cè)血藥濃度，取1ml 全血后，加1%肝素鈉立即搖勻，離心3500轉(zhuǎn)/分，10分鐘，分離血漿。這個(gè)轉(zhuǎn)速和時(shí)間可以嗎？肝素鈉加多少？ 2.沉淀蛋白：取血漿0.5ml，加甲醇（血漿：甲醇=3：1），旋渦1min，4000轉(zhuǎn)/分，10分鐘，取上清液，于50℃水浴氮?dú)獯蹈桑?mL超純水復(fù)溶，旋渦1 min。什么叫旋渦？如果不氮?dú)獯蹈�，可否用其它方法？還有是否要復(fù)溶呢？ 3.準(zhǔn)備用液-液萃�。杭状既芙馍鲜錾锨逡海ㄓ袡C(jī)相：水相=2：1），高速離心，請(qǐng)上清于HPLC進(jìn)樣測(cè)量。請(qǐng)問(wèn)，除了甲醇還有別的溶劑可選擇嗎？我準(zhǔn)備預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)試一下。高速離心速度多少才合適，離心時(shí)間呢？ 4.我看還有個(gè)濃集的步驟，請(qǐng)問(wèn)是怎么操作呢？ 5.這些操作，比如2中取血漿，用移液槍合適嗎，還是要用微量注射器，移液管之類(lèi)的呢？ 問(wèn)題有點(diǎn)多，請(qǐng)了解的大俠們指點(diǎn)指點(diǎn)。謝謝。 |
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rainbow_zyt
木蟲(chóng) (小有名氣)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
豆哥: 金幣+1, 謝謝參與交流 2012-05-14 08:58:50
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問(wèn)題一：轉(zhuǎn)速和時(shí)間合適，肝素鈉加入量的原則是：1ml的血液需要肝素0.1-0.2mg或者20IU（1mg相當(dāng)于126IU），具體看你使用的肝素的活性配制一定濃度的水溶液就可以，這個(gè)量不要求太準(zhǔn)確。 問(wèn)題二：渦旋就是充分的混合，讓蛋白質(zhì)沉淀，讓你的藥物從蛋白質(zhì)中釋放出來(lái)。不用氮?dú)獯蹈�，可以用真空旋轉(zhuǎn)蒸干，但是如果你的量很少的話，損失很?chē)?yán)重，因此建議用氮?dú)獯蹈�，氮�(dú)庥植毁F。 問(wèn)題三：液相流動(dòng)相的選取是要參考你的目標(biāo)檢測(cè)物的，除了甲醇，還有乙腈等可以選擇，乙腈的效果一般比甲醇好些，但是具體問(wèn)題具體分析。 問(wèn)題四：藥物的濃縮富集有很多種方法，例如過(guò)柱子洗脫富集、蒸干溶劑富集等等，找到一種合適自己的，具體操作要看你選取什么樣的富集方法。 問(wèn)題五：移液槍當(dāng)然操作起來(lái)比移液管之類(lèi)的簡(jiǎn)單而且，對(duì)于微升級(jí)別體積的溶液你能用移液管嗎？ 建議去圖書(shū)館找相關(guān)書(shū)籍看看 |
3樓2012-05-11 16:53:16
2樓2012-05-11 13:00:05
4樓2012-05-13 13:21:29
believe123
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