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vitc捐助貴賓 (小有名氣)
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[求助]
測小鼠中血藥濃度的幾個(gè)問題
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本人學(xué)化學(xué)的,對藥代動(dòng)力學(xué)方面不是很了解,有幾個(gè)問題想請教大家: 1.用HPLC測血藥濃度,取1ml 全血后,加1%肝素鈉立即搖勻,離心3500轉(zhuǎn)/分,10分鐘,分離血漿。這個(gè)轉(zhuǎn)速和時(shí)間可以嗎?肝素鈉加多少? 2.沉淀蛋白:取血漿0.5ml,加甲醇(血漿:甲醇=3:1),旋渦1min,4000轉(zhuǎn)/分,10分鐘,取上清液,于50℃水浴氮?dú)獯蹈桑?mL超純水復(fù)溶,旋渦1 min。什么叫旋渦?如果不氮?dú)獯蹈,可否用其它方法?還有是否要復(fù)溶呢? 3.準(zhǔn)備用液-液萃取:甲醇溶解上述上清液,(有機(jī)相:水相=2:1),高速離心,請上清于HPLC進(jìn)樣測量。請問,除了甲醇還有別的溶劑可選擇嗎?我準(zhǔn)備預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)試一下。高速離心速度多少才合適,離心時(shí)間呢? 4.我看還有個(gè)濃集的步驟,請問是怎么操作呢? 5.這些操作,比如2中取血漿,用移液槍合適嗎,還是要用微量注射器,移液管之類的呢? 問題有點(diǎn)多,請了解的大俠們指點(diǎn)指點(diǎn)。謝謝。 |
木蟲 (小有名氣)
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問題一:轉(zhuǎn)速和時(shí)間合適,肝素鈉加入量的原則是:1ml的血液需要肝素0.1-0.2mg或者20IU(1mg相當(dāng)于126IU),具體看你使用的肝素的活性配制一定濃度的水溶液就可以,這個(gè)量不要求太準(zhǔn)確。 問題二:渦旋就是充分的混合,讓蛋白質(zhì)沉淀,讓你的藥物從蛋白質(zhì)中釋放出來。不用氮?dú)獯蹈,可以用真空旋轉(zhuǎn)蒸干,但是如果你的量很少的話,損失很嚴(yán)重,因此建議用氮?dú)獯蹈桑獨(dú)庥植毁F。 問題三:液相流動(dòng)相的選取是要參考你的目標(biāo)檢測物的,除了甲醇,還有乙腈等可以選擇,乙腈的效果一般比甲醇好些,但是具體問題具體分析。 問題四:藥物的濃縮富集有很多種方法,例如過柱子洗脫富集、蒸干溶劑富集等等,找到一種合適自己的,具體操作要看你選取什么樣的富集方法。 問題五:移液槍當(dāng)然操作起來比移液管之類的簡單而且,對于微升級別體積的溶液你能用移液管嗎? 建議去圖書館找相關(guān)書籍看看 |


金蟲 (初入文壇)
銀蟲 (小有名氣)
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1.用HPLC測血藥濃度,現(xiàn)在管子中加10ul肝素,取0.3ml(太多老鼠要死了) 全血后,,離心8000轉(zhuǎn)/分,5分鐘,分離血漿。 2.沉淀蛋白:取血漿0.5ml,加甲醇(血漿:甲醇=3:1),旋渦1min,4000轉(zhuǎn)/分,10分鐘,取上清液,于50℃水浴氮?dú)獯蹈桑?mL超純水復(fù)溶,旋渦1 min。什么叫旋渦(就是旋渦振蕩)?如果不氮?dú)獯蹈桑煞裼闷渌椒ǎǹ諝獯蹈桑?還有是否要復(fù)溶呢(那干的你怎么進(jìn)樣,下面你要液液萃取,豈能沒液)? 3.準(zhǔn)備用液-液萃。杭状既芙馍鲜錾锨逡,(有機(jī)相:水相=2:1),高速離心,請上清于HPLC進(jìn)樣測量。請問,除了甲醇還有別的溶劑可選擇嗎?我準(zhǔn)備預(yù)實(shí)驗(yàn)時(shí)試一下。高速離心速度多少才合適,離心時(shí)間呢(20000or150000 10min)? 4.我看還有個(gè)濃集的步驟,請問是怎么操作呢? 5.這些操作,比如2中取血漿,用移液槍合適嗎(合適,200的),還是要用微量注射器,移液管之類的呢? 問題有點(diǎn)多,請了解的大俠們指點(diǎn)指點(diǎn)。謝謝。 |

木蟲 (小有名氣)
至尊木蟲 (職業(yè)作家)

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