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shaoxin816銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
【求助】藻類protein的測定
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| 本人要測定螺旋藻中protein的含量，打算用SDS-PAGE或者Lowry法~問題來了，測定之前需要那些預(yù)處理？剛剛接觸~不懂不懂。 |
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7樓2012-05-18 18:25:17
2樓2012-05-11 23:02:50
shaoxin816
銀蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 12 (小學生)
- 金幣: 598.8
- 散金: 2421
- 紅花: 9
- 帖子: 531
- 在線: 189.4小時
- 蟲號: 993171
- 注冊: 2010-04-10
- 專業(yè): 細胞周期與調(diào)控
3樓2012-05-14 16:46:36
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
shaoxin816: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 謝謝啦~~ 2012-05-14 19:56:59
shaoxin816: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 謝謝啦~~ 2012-05-14 19:56:59
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2 細胞蛋白含量的測定 蛋白質(zhì)測定采用考馬氏亮藍染色法，以牛血清清蛋白做標準物。 (1) 考馬斯亮藍G-250溶液的配制 準確稱取100mg考馬斯亮藍G-250，溶于50mL95％乙醇中，加入85％磷酸100mL，用蒸餾水定容到lL，濾紙過濾后，保存于棕色瓶中。 (2) 蛋白質(zhì)標準溶液的配制(100 ug／mL) 采用5mg/ml的標準牛血清白蛋白溶液，加蒸餾水溶解并定容，配制成100ug/ml。 (3) 標準曲線的制作 從100 ug/ml的蛋白質(zhì)標準溶液中分別準確吸取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于10ml試管中，并加入相應(yīng)量的蒸餾水至1ml后加入5.0 mL考馬斯亮藍溶液充分混合，放置至少2 min，用l cm光徑比色皿在595nm下測得溶液吸光度。以蛋白質(zhì)濃度(C)為橫坐標，以吸光度(A)為縱坐標，得出標準曲線為A=0.0081C+0.0024，R2=0.9978。 (4) 蛋白質(zhì)含量的測定 準確吸取藻液5 mL，5000 r／min轉(zhuǎn)速下離心10 min后，倒掉上清液，加入同等量0.1M的PBS。超聲波破碎儀選擇功率30%，Pause On 3 s, Pause Off 1s,冰浴。破碎完全后，5000 r／min轉(zhuǎn)速下離心10min，取1 mL上清液，加入5mL考馬斯亮藍溶液，用1 mLPBS和5mL考馬斯亮藍混合溶液作對照，在595 nm波長下用紫外分光光度計測其吸光度值。根據(jù)標準曲線換算蛋白質(zhì)的含量。 |
4樓2012-05-14 18:35:14
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