 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3456 | 回復(fù): 22 | ||||
[求助]
植物RNA的提取
|
||||
|
我在提富含多糖多酚的植物的RNA，提的效果不是很好，大家有什么好方法沒 我在文獻(xiàn)中查到了CTAB結(jié)合SDS法，這個(gè)方法如下我對其中的幾個(gè)溫度不太理解 請大俠們解釋下吧 第二步中的提到的低溫處理 起到了什么作用啊 大家也幫我看下這個(gè)方法有什么不合理的地方?jīng)] 謝謝大家了 1 CTAB結(jié)合SDS法。分別稱取葉片、葉柄和韌皮部各0.4 g于研缽中，加入0.05 g PVP，加入適量液氮，迅速研磨成粉末狀，并將所有粉末全部轉(zhuǎn)入2 mL離心管中；加入800 μL提取液（680 μL CTAB提取液、 80 μL 10%SDS、40 μL β-巰基乙醇； CTAB 提取液成分為：2%CTAB、2.5 mol/L NaCl、0.5 mol/L Tris、50 mmol/LEDTA），用力劇烈震蕩使所有粉末均勻懸浮于提取液中； 2 [font=黑體]65℃水浴20 min，期間劇烈震蕩，使其充分混合，水浴后將離心管迅速放入-80℃冰箱中低溫處理2 h以上； 3 取出經(jīng)低溫處理后的混合物，將其置于45℃水浴10 min，期間輕輕震蕩，使完全溶解； 4 4℃，12000 r/min 離心30 min，將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷的2 mL離心管中，加入等體積酚∶氯仿∶異戊醇(25:24:1，V/V/V)，在冰上用力振蕩，使其充分混勻， 5 4℃，12000 r/min離心15 min（抽提2次），將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷過的1.5 mL離心管中，加入12 mol/L LiCl，使其終濃度為2 mol/L，冰上輕震蕩充分混勻后置于-20℃條件下存放2 h以上； 6 4℃，12000 r/min 離心 10 min，去除上清液，加入 400 μL 預(yù)冷的75%的酒精清洗（重復(fù)2次）；室溫下干燥15 min，加 20 μL DEPC-H2O 溶 解 進(jìn) 行 下 一 步 試 驗(yàn) 或 置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩? |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 共享有用資源 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有144人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 植物RNA提取后電泳檢測
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 請問用于提取rna的植物組織材料在-80能存放多久？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 從植物葉片的總RNA中提取出miRNA，這個(gè)miRNA是未知的，有效的方法怎么做？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 植物RNA提取試劑盒
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】買提取植物RNA的試劑盒
已經(jīng)有4人回復(fù)
- 【求助/交流】異硫氰酸胍法提取植物RNA中DNA殘留問題~回帖就送幣�。�！
已經(jīng)有14人回復(fù)
- 【求助/交流】請教植物RNA提取和轉(zhuǎn)錄組學(xué)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】植物組織RNA提取求高人指點(diǎn)
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【求助/交流】苦瓜各部分抽提總RNA所遇到的關(guān)于材料和試劑的問題
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】想問問天根植物總RNA提取試劑盒的使用
已經(jīng)有9人回復(fù)
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時(shí)
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
|
嗯.................. 嘿嘿 教你個(gè)更加有效的干燥方法： 乙醇洗完后 傾倒掉大部分乙醇 后短暫離心 甩1-2s即可 使用100uL的移液槍套上黃槍頭后再套10uL系列白槍頭（這樣主要是底下剩余的液體絕對比10uL多 但黃槍頭開口大移液時(shí)肯定移不干凈 同時(shí)可能粘乙醇到壁上） 需要用力攥緊（這里需要點(diǎn)技巧）這時(shí)候吸取底部殘余乙醇 不用2分鐘基本就能干透 避免了RNA長時(shí)間暴漏于空氣中 我基本上8個(gè)樣品的話 吸掉最后一個(gè)樣品的乙醇時(shí)第一個(gè)已經(jīng)干透了  |
17樓2012-05-23 00:54:57
starseacow
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +426 - MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 1217 (講師)
- 金幣: 9097.3
- 散金: 16445
- 紅花: 226
- 帖子: 4669
- 在線: 2320.2小時(shí)
- 蟲號: 1136974
- 注冊: 2010-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
- 管轄: 動植物
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★
西瓜: 金幣+3, Good！ 2012-05-14 18:52:49
歡仔: 金幣+3, ★★★★★最佳答案, 非常感謝 2012-05-14 21:25:18
西瓜: 金幣+3, Good！ 2012-05-14 18:52:49
歡仔: 金幣+3, ★★★★★最佳答案, 非常感謝 2012-05-14 21:25:18
|
同意樓上的意見，可能要在操作上下點(diǎn)功夫。樓主所說的CTAB-SDS法，我只查到2012年中國農(nóng)學(xué)通報(bào)上一篇關(guān)于葡萄的文章，不知樓主是否參考的這個(gè)。這種方法沒見別的文獻(xiàn)有報(bào)道，建議樓主參考時(shí)要謹(jǐn)慎。 多糖多酚類植物材料提RNA，我覺得主要需要添加一步抽提派出糖及酚的干擾，我手頭收集的文獻(xiàn)有建議使用70%丙酮抽提后用SDS-LiCl法提取。此外還有很多文獻(xiàn)提出有用的建議，樓主不妨以比較可靠的經(jīng)典方法做基礎(chǔ)，參考這些文獻(xiàn)自己摸索一下，不要盲目照著單一文獻(xiàn)做。 |
11樓2012-05-14 18:17:50
5樓2012-05-14 08:42:33
10樓2012-05-14 17:18:16
淘氣維尼89
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 2193.1
- 帖子: 129
- 在線: 125.1小時(shí)
- 蟲號: 1764336
- 注冊: 2012-04-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 抗體工程學(xué)
13樓2012-05-15 09:01:38
starseacow
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +426 - MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 1217 (講師)
- 金幣: 9097.3
- 散金: 16445
- 紅花: 226
- 帖子: 4669
- 在線: 2320.2小時(shí)
- 蟲號: 1136974
- 注冊: 2010-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
- 管轄: 動植物
2樓2012-05-13 22:32:57
3樓2012-05-13 23:56:14
starseacow
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗(yàn): +426 - MolEPI: 3
- 應(yīng)助: 1217 (講師)
- 金幣: 9097.3
- 散金: 16445
- 紅花: 226
- 帖子: 4669
- 在線: 2320.2小時(shí)
- 蟲號: 1136974
- 注冊: 2010-11-02
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物生理與生化
- 管轄: 動植物
4樓2012-05-14 00:23:38
c19345174
銀蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 446.1
- 帖子: 25
- 在線: 24.7小時(shí)
- 蟲號: 1689833
- 注冊: 2012-03-14
- 性別: GG
- 專業(yè): 中藥學(xué)其他科學(xué)問題
6樓2012-05-14 13:08:24
7樓2012-05-14 14:44:07
8樓2012-05-14 14:44:32
9樓2012-05-14 14:48:41
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 歡仔 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿河北工業(yè)大學(xué)0817化工278分求調(diào)劑 +7 | jhybd 2026-03-23 | 11/550 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +17 | chaojifeixia 2026-03-19 | 19/950 |
|
|
[考研] 一志愿國科過程所081700，274求調(diào)劑 +3 | 三水研0水立方 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +5 | prayer13 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料專碩英一數(shù)二306 +8 | z1z2z3879 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調(diào)劑 +5 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 324 +3 | Promise-jyl 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 280分求調(diào)劑 一志愿085802 +4 | PUMPT 2026-03-22 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿 西北大學(xué) ，070300化學(xué)學(xué)碩，總分287，雙非一本，求調(diào)劑。 +3 | 晨昏線與星海 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 廣西大學(xué)材料導(dǎo)師推薦 +3 | 夏夏夏小正 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)297求調(diào)劑 +3 | Daisy☆ 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +4 | www_q 2026-03-20 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師大 070300（化學(xué)）304分求調(diào)劑 +3 | 0703武芊慧雪304 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +9 | 想上學(xué)吖吖 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 中南大學(xué)化學(xué)學(xué)碩337求調(diào)劑 +3 | niko- 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | eation27 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿福大288有機(jī)化學(xué)，求調(diào)劑 +3 | 小木蟲200408204 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 收復(fù)試調(diào)劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|