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[求助]
植物RNA的提取
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我在提富含多糖多酚的植物的RNA，提的效果不是很好，大家有什么好方法沒(méi) 我在文獻(xiàn)中查到了CTAB結(jié)合SDS法，這個(gè)方法如下我對(duì)其中的幾個(gè)溫度不太理解 請(qǐng)大俠們解釋下吧 第二步中的提到的低溫處理 起到了什么作用啊 大家也幫我看下這個(gè)方法有什么不合理的地方?jīng)] 謝謝大家了 1 CTAB結(jié)合SDS法。分別稱取葉片、葉柄和韌皮部各0.4 g于研缽中，加入0.05 g PVP，加入適量液氮，迅速研磨成粉末狀，并將所有粉末全部轉(zhuǎn)入2 mL離心管中；加入800 μL提取液（680 μL CTAB提取液、 80 μL 10%SDS、40 μL β-巰基乙醇； CTAB 提取液成分為：2%CTAB、2.5 mol/L NaCl、0.5 mol/L Tris、50 mmol/LEDTA），用力劇烈震蕩使所有粉末均勻懸浮于提取液中； 2 [font=黑體]65℃水浴20 min，期間劇烈震蕩，使其充分混合，水浴后將離心管迅速放入-80℃冰箱中低溫處理2 h以上； 3 取出經(jīng)低溫處理后的混合物，將其置于45℃水浴10 min，期間輕輕震蕩，使完全溶解； 4 4℃，12000 r/min 離心30 min，將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷的2 mL離心管中，加入等體積酚∶氯仿∶異戊醇(25:24:1，V/V/V)，在冰上用力振蕩，使其充分混勻， 5 4℃，12000 r/min離心15 min（抽提2次），將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷過(guò)的1.5 mL離心管中，加入12 mol/L LiCl，使其終濃度為2 mol/L，冰上輕震蕩充分混勻后置于-20℃條件下存放2 h以上； 6 4℃，12000 r/min 離心 10 min，去除上清液，加入 400 μL 預(yù)冷的75%的酒精清洗（重復(fù)2次）；室溫下干燥15 min，加 20 μL DEPC-H2O 溶 解 進(jìn) 行 下 一 步 試 驗(yàn) 或 置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩? |
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嗯.................. 嘿嘿 教你個(gè)更加有效的干燥方法： 乙醇洗完后 傾倒掉大部分乙醇 后短暫離心 甩1-2s即可 使用100uL的移液槍套上黃槍頭后再套10uL系列白槍頭（這樣主要是底下剩余的液體絕對(duì)比10uL多 但黃槍頭開(kāi)口大移液時(shí)肯定移不干凈 同時(shí)可能粘乙醇到壁上） 需要用力攥緊（這里需要點(diǎn)技巧）這時(shí)候吸取底部殘余乙醇 不用2分鐘基本就能干透 避免了RNA長(zhǎng)時(shí)間暴漏于空氣中 我基本上8個(gè)樣品的話 吸掉最后一個(gè)樣品的乙醇時(shí)第一個(gè)已經(jīng)干透了  |
17樓2012-05-23 00:54:57
starseacow
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【答案】應(yīng)助回帖
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西瓜: 金幣+3, Good！ 2012-05-14 18:52:49
歡仔: 金幣+3, ★★★★★最佳答案, 非常感謝 2012-05-14 21:25:18
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同意樓上的意見(jiàn)，可能要在操作上下點(diǎn)功夫。樓主所說(shuō)的CTAB-SDS法，我只查到2012年中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)上一篇關(guān)于葡萄的文章，不知樓主是否參考的這個(gè)。這種方法沒(méi)見(jiàn)別的文獻(xiàn)有報(bào)道，建議樓主參考時(shí)要謹(jǐn)慎。 多糖多酚類植物材料提RNA，我覺(jué)得主要需要添加一步抽提派出糖及酚的干擾，我手頭收集的文獻(xiàn)有建議使用70%丙酮抽提后用SDS-LiCl法提取。此外還有很多文獻(xiàn)提出有用的建議，樓主不妨以比較可靠的經(jīng)典方法做基礎(chǔ)，參考這些文獻(xiàn)自己摸索一下，不要盲目照著單一文獻(xiàn)做。 |
11樓2012-05-14 18:17:50
5樓2012-05-14 08:42:33
10樓2012-05-14 17:18:16
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13樓2012-05-15 09:01:38
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2樓2012-05-13 22:32:57
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4樓2012-05-14 00:23:38
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6樓2012-05-14 13:08:24
7樓2012-05-14 14:44:07
8樓2012-05-14 14:44:32
9樓2012-05-14 14:48:41
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