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[求助]
植物RNA的提取
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我在提富含多糖多酚的植物的RNA，提的效果不是很好，大家有什么好方法沒 我在文獻中查到了CTAB結(jié)合SDS法，這個方法如下我對其中的幾個溫度不太理解 請大俠們解釋下吧 第二步中的提到的低溫處理 起到了什么作用啊 大家也幫我看下這個方法有什么不合理的地方?jīng)] 謝謝大家了 1 CTAB結(jié)合SDS法。分別稱取葉片、葉柄和韌皮部各0.4 g于研缽中，加入0.05 g PVP，加入適量液氮，迅速研磨成粉末狀，并將所有粉末全部轉(zhuǎn)入2 mL離心管中；加入800 μL提取液（680 μL CTAB提取液、 80 μL 10%SDS、40 μL β-巰基乙醇； CTAB 提取液成分為：2%CTAB、2.5 mol/L NaCl、0.5 mol/L Tris、50 mmol/LEDTA），用力劇烈震蕩使所有粉末均勻懸浮于提取液中； 2 [font=黑體]65℃水浴20 min，期間劇烈震蕩，使其充分混合，水浴后將離心管迅速放入-80℃冰箱中低溫處理2 h以上； 3 取出經(jīng)低溫處理后的混合物，將其置于45℃水浴10 min，期間輕輕震蕩，使完全溶解； 4 4℃，12000 r/min 離心30 min，將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷的2 mL離心管中，加入等體積酚∶氯仿∶異戊醇(25:24:1，V/V/V)，在冰上用力振蕩，使其充分混勻， 5 4℃，12000 r/min離心15 min（抽提2次），將上清液轉(zhuǎn)入預(yù)冷過的1.5 mL離心管中，加入12 mol/L LiCl，使其終濃度為2 mol/L，冰上輕震蕩充分混勻后置于-20℃條件下存放2 h以上； 6 4℃，12000 r/min 離心 10 min，去除上清液，加入 400 μL 預(yù)冷的75%的酒精清洗（重復(fù)2次）；室溫下干燥15 min，加 20 μL DEPC-H2O 溶 解 進 行 下 一 步 試 驗 或 置于-80℃冰箱中保存?zhèn)溆谩? |
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9樓2012-05-14 14:48:41
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2樓2012-05-13 22:32:57
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