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[求助]
用乙醇沉淀多糖或蛋白時(shí)加入鹽的濃度
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| 用乙醇沉淀多糖或蛋白時(shí)加入鹽（如NaCl)的作用是什么？鹽濃度應(yīng)為多少，怎樣去確定？ |
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2樓2012-05-15 21:36:00
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我看文獻(xiàn)上加入的鹽濃度都很低，大都在0.1-0.25mol/L之間，那應(yīng)該還是在鹽溶條件下啊。盡管有乙醇存在，但我認(rèn)為這也不是鹽析的原理吧？再提取DMA是我查到這樣一句話(huà)“高鹽的3mol／L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因?yàn)橹泻秃怂嵘系碾姾�，減少相斥力而互相聚合，后者是因?yàn)殁c鹽與SDS－蛋白復(fù)合物作用后，能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物，使沉淀更完全。”我想原理應(yīng)該差不多，關(guān)鍵是這個(gè)濃度的問(wèn)題，濃度無(wú)所謂嗎？低了高了有什么不良后果？ |
3樓2012-05-15 21:45:23
yag768: 回帖置頂 2012-05-15 21:53:10
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我自己查到了！�。∠旅娴脑響�(yīng)該差不多。 在用乙醇沉淀DNA時(shí)，為什么一定要加NaAc或NaCl至最終濃度達(dá)0.1～0.25mol/L？ 在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na+中和DNA分子上的負(fù)電荷，減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時(shí)，只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時(shí)，其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過(guò)多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進(jìn)行洗滌或重沉淀。 |
4樓2012-05-15 21:52:45
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