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[交流]
蛋白激酶原核表達 已有5人參與
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大家好： 我先要原核表達純化一中絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶， 我們實驗室做的是細菌，一般用PET-28a或32a表達載體，轉(zhuǎn)入BL21中，上Ni柱親和純化重組蛋白。開始原核表達前會分析該蛋白的信號肽、跨膜區(qū)，一般去除跨膜區(qū)再原核表達的。我的問題是： 1、我要表達的這個絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶由660個氨基酸組成，跨膜區(qū)在中間，即蛋白一部分在膜內(nèi)，一半在膜外。若去除跨膜區(qū)，蛋白活性會不會有影響？因為該蛋白是一種激酶。 2、若全長表達，編碼基因過長我。現(xiàn)在是全長克隆，剛連上PMD18-T載體，轉(zhuǎn)化后挑陽性克隆測序，測序序列與我們目的基因序列不能100%吻合，已測過6次序列，均不能100%成功。怎么辦呢？ 3、表達載體要不要換呢？ 歡迎各位提出寶貴意見，謝謝。 |
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3樓2012-05-20 13:24:31
2樓2012-05-20 08:43:17
shenlin0514
木蟲 (正式寫手)
無名小蟲
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- 專業(yè): 免疫學(xué)研究新技術(shù)與新方法
guojj
4樓2012-05-21 09:17:30
5樓2012-05-21 12:44:47
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