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夢(mèng)-妖精鐵蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于RNA反轉(zhuǎn)錄
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| 我們實(shí)驗(yàn)反轉(zhuǎn)錄的試劑盒是Reverse Transcriptase M-MLV（RNase H-）TaKaRa 寶生物工程（大連）有限公司 里面只有5xM-MLV Buffer和RTase M-MLV(RNase H-)這兩種試劑，其他的Oligo(dT)和dNTP Mixture都沒(méi)有，我們之前有個(gè)別的試劑盒，里面有這兩樣，但是后面的（μM)不一樣，這樣反轉(zhuǎn)錄的還可以嗎？？？比如，要求的Oligo(dT)12-18 Primer (50μM),而我有的只是10μM，前者加一微升，后者加5微升，就一樣了嗎？？？還是怎么樣子？最后真的有必要檢測(cè)cDNA嗎，好茫然啊~（提取的是兩棲類的RNA，質(zhì)量還可以，有明顯的兩條帶） |
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孫啟亮
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4樓2012-05-23 17:28:48
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，今天很有空哦 2012-05-23 14:08:51
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小丹木木: 金幣+1, 鼓勵(lì)應(yīng)助，今天很有空哦 2012-05-23 14:08:51
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嗯..................... 當(dāng)然可以啊 10uM多加4倍體積就成了50uM啦 沒(méi)有必要檢測(cè)cDNA 因?yàn)槠胀ǚ椒阋矝](méi)法檢測(cè) 如果不放心參照某些文獻(xiàn)設(shè)計(jì)引物做3‘/5’完整度實(shí)驗(yàn)這是通用的檢測(cè)cDNA方法 個(gè)人看法 若有說(shuō)錯(cuò)請(qǐng)高手指點(diǎn)  |
2樓2012-05-23 12:53:39
夢(mèng)-妖精
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3樓2012-05-23 14:59:56
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5樓2012-05-25 21:56:00
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6樓2012-05-25 22:13:19
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7樓2012-05-27 10:23:37
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8樓2012-05-27 15:10:24
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10樓2012-05-29 10:50:25
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