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mche2005木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
7-5-3
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[求助]
在用CTAB法提取曲霉總DNA時(shí),提取很多次沒(méi)有成功,期望大家多多幫助。
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1、PDA培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間(72h),真菌菌絲體9000轉(zhuǎn)離心3min,濾紙吸水。吸除絕大部分水分,否則,含水量過(guò)大會(huì)嚴(yán)重影響液氮研磨的效率。 或者直接用滅菌的八折紗布進(jìn)行過(guò)濾。 2、研缽(液氮研磨)至粉末?焖傺心,嚴(yán)防液氮濺射。研磨過(guò)程中防止樣品因?yàn)橐旱獡]發(fā)所導(dǎo)致的凍融。 3、加入預(yù)熱的CTAB700uL,輕柔的顛倒混勻,65℃水浴1h(每隔10min搖一次),室溫12000rpm,10min,吸取上清。 4、加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),12000rpm,5min,取上清(500uL)。 5、加入等體積的氯仿:異戊醇(24:1),12000rpm,5min,4℃離心后,取上清液(500uL)。 6、加入-20℃預(yù)先冷存異丙醇(2/3體積),-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm,10min,4℃離心后取上清。 7、75%乙醇洗滌2次,12000rpm,3min,4℃離心。 8、室溫晾干10-15min,加入20-50uL TE溶解。 9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保溫30 min 以上。 10、取 4u L 電泳。加入1uL Rnase 37攝氏度消化30min,電泳檢測(cè)結(jié)果 結(jié)果,提了很多次都沒(méi)有成功,請(qǐng)問(wèn)是什么原因? |
鐵桿木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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