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mche2005木蟲 (正式寫手)
7-5-3
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[求助]
在用CTAB法提取曲霉總DNA時，提取很多次沒有成功，期望大家多多幫助。
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1、PDA培養(yǎng)適當(dāng)時間（72h），真菌菌絲體9000轉(zhuǎn)離心3min，濾紙吸水。吸除絕大部分水分，否則，含水量過大會嚴(yán)重影響液氮研磨的效率。 或者直接用滅菌的八折紗布進(jìn)行過濾。 2、研缽（液氮研磨）至粉末。快速研磨，嚴(yán)防液氮濺射。研磨過程中防止樣品因為液氮揮發(fā)所導(dǎo)致的凍融。 3、加入預(yù)熱的CTAB700uL，輕柔的顛倒混勻，65℃水浴1h（每隔10min搖一次），室溫12000rpm，10min，吸取上清。 4、加入等體積的氯仿：異戊醇（24:1），12000rpm，5min，取上清（500uL）。 5、加入等體積的氯仿：異戊醇（24:1），12000rpm，5min，4℃離心后，取上清液（500uL）。 6、加入-20℃預(yù)先冷存異丙醇（2/3體積），-20℃冰箱沉淀1h。12000rpm，10min，4℃離心后取上清。 7、75%乙醇洗滌2次，12000rpm，3min，4℃離心。 8、室溫晾干10-15min，加入20-50uL TE溶解。 9、加入RNase A (10 mg/mL) ,37℃保溫30 min 以上。 10、取 4u L 電泳。加入1uL Rnase 37攝氏度消化30min，電泳檢測結(jié)果 結(jié)果，提了很多次都沒有成功，請問是什么原因？ |
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2樓2012-05-23 11:32:52
3樓2012-05-23 11:56:35
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