 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3752 | 回復(fù): 26 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
emma立夏鐵蟲 (初入文壇)
|
[求助]
如何提高連接效率呢？
|
|
|
各位科研上的戰(zhàn)友，大家?guī)臀铱纯捶治鲆幌聦?shí)驗(yàn)失敗的原因。 我是從T載體上雙酶切（酶為EcoR I和Sal I）下了我的目的片段，然后載體也已經(jīng)用相同的酶的線性化，做到連接轉(zhuǎn)化這一步老是不成功，很困惑。 連接體系是： 片段 6ul 線性化載體 2ul T4ligase 1ul buffer 1ul total 10ul 16℃反應(yīng)4h，4℃過夜，之后加100ul感受態(tài)。轉(zhuǎn)化 在轉(zhuǎn)化和感受態(tài)都是沒問題的，因?yàn)樽隽藢φ赵囼?yàn)。 我的濃度比基本都是看條帶marker亮度估算的，沒用相關(guān)儀器來檢測準(zhǔn)確濃度。 很多戰(zhàn)友都說要不斷摸索片段和載體的濃度比【這步是否需要呢？】。那這樣是否需要很多次的連接轉(zhuǎn)化呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有294人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有4人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 酶切后未純化連接出現(xiàn)的問題
已經(jīng)有18人回復(fù)
- 有機(jī)問高分子的問題！~！蛋白連接，金幣可追加，求大神
已經(jīng)有13人回復(fù)
- 提高DNA連接效率操作問題
已經(jīng)有19人回復(fù)
- 求助 雙酶切驗(yàn)證陽性克隆的問題
已經(jīng)有12人回復(fù)
- 【資料】分子生物學(xué)常見問題解答
已經(jīng)有30人回復(fù)
- puf酶與普通Taq酶混用PCR問題
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【討論】芳香胺成酰胺的反應(yīng)（與酸酐或者二羧酸）
已經(jīng)有9人回復(fù)
- 【求助/交流】如何提高連接效率？
已經(jīng)有5人回復(fù)
- 【求助/交流】連接效率問題
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【求助/交流】基因克隆實(shí)驗(yàn)為非目的片段？
已經(jīng)有27人回復(fù)
emma立夏
鐵蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 20
- 帖子: 36
- 在線: 10小時(shí)
- 蟲號: 1314207
- 注冊: 2011-06-03
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
5樓2012-05-29 14:31:52
yunocn
金蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 8 (幼兒園)
- 金幣: 1005.4
- 散金: 26
- 帖子: 165
- 在線: 122.5小時(shí)
- 蟲號: 1175684
- 注冊: 2010-12-23
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
2樓2012-05-28 17:17:27
caohaojie316
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
- 金幣: 174
- 散金: 619
- 紅花: 5
- 帖子: 337
- 在線: 62.1小時(shí)
- 蟲號: 1830322
- 注冊: 2012-05-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
3樓2012-05-28 21:47:49
countingcrow
鐵桿木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 7322.6
- 散金: 140
- 紅花: 3
- 帖子: 271
- 在線: 520.2小時(shí)
- 蟲號: 1807081
- 注冊: 2012-05-09
- 性別: GG
- 專業(yè): 自身免疫性疾病
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流，這的確是需要注意的哦 2012-05-29 13:48:11
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流，這的確是需要注意的哦 2012-05-29 13:48:11
|
有幾個(gè)問題： 1. 載體上ECOR I 和 Sal I 位點(diǎn)距離會(huì)不會(huì)太近？一般來說兩個(gè)克隆位點(diǎn)如果相距太近，會(huì)影響酶切效率，導(dǎo)致只有一個(gè)位點(diǎn)切開。 2. 載體酶切時(shí)條件掌握得好不好，酶切時(shí)間會(huì)不會(huì)太短？如果酶切條件不好，會(huì)使載體酶切不完全。 3. 感受態(tài)細(xì)胞的體積是不是考慮搞多一些，否則酶切體系里的甘油會(huì)影響轉(zhuǎn)化效率。 4. 載體的抗性基因是不是搞錯(cuò)了，是卡那抗性還是氨芐抗性。 |
4樓2012-05-29 06:33:32
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 290分調(diào)劑求助 +4 | 吉祥止止陳 2026-03-25 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 323分 食品與營養(yǎng)調(diào)劑 +3 | 嘿ooo 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑 +8 | 披星河 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑，一志愿 南京航空航天大學(xué) ，080500材料科學(xué)與工程學(xué)碩，總分289分 +9 | @taotao 2026-03-29 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)學(xué)碩，一志愿湖南大學(xué)，初試成績338 +7 | YYYYYNNNNN 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +14 | 032500 2026-03-25 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)321分求調(diào)劑 +10 | 三dd. 2026-03-30 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 295材料工程專碩求調(diào)劑 +10 | 1428151015 2026-03-27 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 一志愿南開大學(xué)0710生物學(xué)359求調(diào)劑 +5 | 兔兔兔111223314 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料與化工272求調(diào)劑 +21 | 阿斯蒂芬2004 2026-03-28 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +10 | 彼岸t 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料與化工304求B區(qū)調(diào)劑 +4 | 邱gl 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 275求調(diào)劑 +15 | Micky11223 2026-03-25 | 20/1000 |
|
|
|
[考研] 312，生物學(xué)求調(diào)劑 +3 | 小譯同學(xué)abc 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085701環(huán)境工程，267求調(diào)劑 +16 | minht 2026-03-26 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +12 | PolarBear11 2026-03-26 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 347求調(diào)劑 +4 | L when 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|