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TSRCD木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[交流]
做藥動(dòng)時(shí)遇到的一些問(wèn)題
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我最近在做一個(gè)生物堿的藥動(dòng)，其生物利用度差，國(guó)外（印度）報(bào)道其最大血藥（血清）濃度為2µg/ml。我在做回收率考察實(shí)驗(yàn)中也是按照這個(gè)濃度進(jìn)行，回收率達(dá)到了75%，滿足檢測(cè)要求。而我在單倍劑量（與國(guó)外那篇文獻(xiàn)相同）時(shí)，未檢測(cè)出目標(biāo)物，增大為三倍劑量時(shí)也未檢出目標(biāo)物�？赡艿脑蛉缦�，望高人指點(diǎn)： 1、大鼠年齡較大。這批大鼠是前一個(gè)實(shí)驗(yàn)剩下的，約有16周齡。 2、血清放置時(shí)間問(wèn)題。三倍劑量灌胃后取血的這批血清放了有20天。 3、灌胃溶劑問(wèn)題：該生物堿不溶于水，國(guó)外那邊文獻(xiàn)是將其溶于花生油中灌胃，我是將其混懸于0.5%CMC-Na（上一屆做藥效實(shí)驗(yàn)時(shí)是用的該溶劑）灌胃。不知其是否為檢測(cè)不出的決定性原因。 同時(shí)，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中也發(fā)現(xiàn)了一個(gè)很奇怪的峰，暫稱其為內(nèi)源性峰，具體情況如下： 樣品的處理過(guò)程：1ml血清+5ml萃取溶劑（丙酮：乙酸乙酯=2:3），渦旋1min, 取上清氮?dú)獯蹈桑?50µl甲醇復(fù)溶，-20度凍2h，10000轉(zhuǎn)10min，裝進(jìn)樣瓶測(cè)定。 現(xiàn)象：實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，在-20度凍存后，每次拿出幾個(gè)離心進(jìn)樣，每次的頭一個(gè)樣未出現(xiàn)內(nèi)源性峰，后面的就全部都有； 該峰在每個(gè)樣中峰面積都較大，且封面積穩(wěn)定，峰寬約2min（目標(biāo)物<1min），保留時(shí)間逐漸縮短，連續(xù)進(jìn)10個(gè)樣，其保留時(shí)間可以逐漸縮短1.5min(回收率實(shí)驗(yàn)時(shí)也有，該生物堿的峰保留時(shí)間沒(méi)有變化)。通過(guò)調(diào)整流動(dòng)相比例，可以不影響我的測(cè)定； 我所使用的是二極管陣列檢測(cè)器，每次都采集了3D圖譜，可以看見(jiàn)其200-400nm的特征吸收峰，奇怪的是發(fā)現(xiàn)該內(nèi)源性成分與目標(biāo)物的特征吸收峰很相似，199、225處的特征吸收峰僅相差1nm，檢測(cè)波長(zhǎng)處的吸收峰也只相差6nm。 最開(kāi)始看了特征吸收峰我以為是樣品處理過(guò)程中目標(biāo)物結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，但考慮到其保留時(shí)間在目標(biāo)物保留時(shí)間穩(wěn)定的情況下不穩(wěn)定，峰也較寬（2min），峰面積也較穩(wěn)定，個(gè)人覺(jué)得其就是個(gè)雜峰，不知各位有何高見(jiàn)。 現(xiàn)在關(guān)鍵問(wèn)題是灌胃后的血樣中檢測(cè)不出目標(biāo)物，各位有何高招？ |
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TSRCD(金幣+1): 謝謝參與
TSRCD: 金幣+3 2012-05-30 15:03:20
TSRCD: 金幣+1, 那個(gè)內(nèi)源性峰是上一針的殘留，目標(biāo)物10鐘出峰，內(nèi)源性峰26分鐘才出來(lái)，太靠后了。空白也有，估計(jì)也是試劑問(wèn)題，或者該提取試劑本身就會(huì)將血漿中的那個(gè)內(nèi)源性物質(zhì)提取出來(lái) 2012-06-06 10:10:18
TSRCD(金幣+1): 謝謝參與
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| 溶解之后，吸收會(huì)好一些的，而且，國(guó)外的文獻(xiàn)用的是液相嗎，如果別人是質(zhì)譜檢測(cè)的，你用DAD測(cè)不到也正常。關(guān)于你那個(gè)內(nèi)源峰的問(wèn)題，我只是隨便說(shuō)下我們以前遇到的問(wèn)題，希望對(duì)你有幫助吧。我們用乙酸乙酯提取血漿樣品是，前10針沒(méi)有出現(xiàn)怪峰，到10針以后每次都出現(xiàn)，時(shí)間，峰面積都一樣的，我們最后確定其是乙酸乙酯里的東西。我個(gè)人認(rèn)為，老鼠的吸收能力要比新鼠強(qiáng) |
2樓2012-05-30 09:21:27
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9樓2012-05-31 07:49:35
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TSRCD: 金幣+3, 確實(shí)是分析時(shí)間短了的原因，目標(biāo)物10分鐘就出峰了，我只監(jiān)測(cè)15分鐘也算正常，其實(shí)那個(gè)內(nèi)源性峰在26分鐘才出峰，太靠后了 2012-06-06 10:06:17
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TSRCD: 金幣+3, 確實(shí)是分析時(shí)間短了的原因，目標(biāo)物10分鐘就出峰了，我只監(jiān)測(cè)15分鐘也算正常，其實(shí)那個(gè)內(nèi)源性峰在26分鐘才出峰，太靠后了 2012-06-06 10:06:17
| 你的分析時(shí)間太短？前一陣殘留的物質(zhì)？設(shè)置進(jìn)樣前后分別清洗進(jìn)樣針。一針?lè)治鰰r(shí)間延長(zhǎng)，分析時(shí)間后期用大濃度甲醇洗柱子試試。我前面在做藥動(dòng)時(shí)，葛根素灌胃給藥后血液及腦中就檢測(cè)不到，后面只好放棄了。 |
11樓2012-05-31 20:47:35
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2012-05-30 09:54
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xdkevin4樓
2012-05-30 10:02
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