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做藥動時遇到的一些問題
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我最近在做一個生物堿的藥動，其生物利用度差，國外（印度）報道其最大血藥（血清）濃度為2µg/ml。我在做回收率考察實驗中也是按照這個濃度進行，回收率達到了75%，滿足檢測要求。而我在單倍劑量（與國外那篇文獻相同）時，未檢測出目標物，增大為三倍劑量時也未檢出目標物�？赡艿脑蛉缦�，望高人指點： 1、大鼠年齡較大。這批大鼠是前一個實驗剩下的，約有16周齡。 2、血清放置時間問題。三倍劑量灌胃后取血的這批血清放了有20天。 3、灌胃溶劑問題：該生物堿不溶于水，國外那邊文獻是將其溶于花生油中灌胃，我是將其混懸于0.5%CMC-Na（上一屆做藥效實驗時是用的該溶劑）灌胃。不知其是否為檢測不出的決定性原因。 同時，在實驗過程中也發(fā)現(xiàn)了一個很奇怪的峰，暫稱其為內(nèi)源性峰，具體情況如下： 樣品的處理過程：1ml血清+5ml萃取溶劑（丙酮：乙酸乙酯=2:3），渦旋1min, 取上清氮氣吹干，150µl甲醇復(fù)溶，-20度凍2h，10000轉(zhuǎn)10min，裝進樣瓶測定。 現(xiàn)象：實驗過程中，在-20度凍存后，每次拿出幾個離心進樣，每次的頭一個樣未出現(xiàn)內(nèi)源性峰，后面的就全部都有； 該峰在每個樣中峰面積都較大，且封面積穩(wěn)定，峰寬約2min（目標物<1min），保留時間逐漸縮短，連續(xù)進10個樣，其保留時間可以逐漸縮短1.5min(回收率實驗時也有，該生物堿的峰保留時間沒有變化)。通過調(diào)整流動相比例，可以不影響我的測定； 我所使用的是二極管陣列檢測器，每次都采集了3D圖譜，可以看見其200-400nm的特征吸收峰，奇怪的是發(fā)現(xiàn)該內(nèi)源性成分與目標物的特征吸收峰很相似，199、225處的特征吸收峰僅相差1nm，檢測波長處的吸收峰也只相差6nm。 最開始看了特征吸收峰我以為是樣品處理過程中目標物結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，但考慮到其保留時間在目標物保留時間穩(wěn)定的情況下不穩(wěn)定，峰也較寬（2min），峰面積也較穩(wěn)定，個人覺得其就是個雜峰，不知各位有何高見。 現(xiàn)在關(guān)鍵問題是灌胃后的血樣中檢測不出目標物，各位有何高招？ |
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7樓2012-05-30 15:27:43
★ ★ ★ ★ ★
TSRCD(金幣+1): 謝謝參與
TSRCD: 金幣+3 2012-05-30 15:03:20
TSRCD: 金幣+1, 那個內(nèi)源性峰是上一針的殘留，目標物10鐘出峰，內(nèi)源性峰26分鐘才出來，太靠后了�？瞻滓灿�，估計也是試劑問題，或者該提取試劑本身就會將血漿中的那個內(nèi)源性物質(zhì)提取出來 2012-06-06 10:10:18
TSRCD(金幣+1): 謝謝參與
TSRCD: 金幣+3 2012-05-30 15:03:20
TSRCD: 金幣+1, 那個內(nèi)源性峰是上一針的殘留，目標物10鐘出峰，內(nèi)源性峰26分鐘才出來，太靠后了�？瞻滓灿�，估計也是試劑問題，或者該提取試劑本身就會將血漿中的那個內(nèi)源性物質(zhì)提取出來 2012-06-06 10:10:18
| 溶解之后，吸收會好一些的，而且，國外的文獻用的是液相嗎，如果別人是質(zhì)譜檢測的，你用DAD測不到也正常。關(guān)于你那個內(nèi)源峰的問題，我只是隨便說下我們以前遇到的問題，希望對你有幫助吧。我們用乙酸乙酯提取血漿樣品是，前10針沒有出現(xiàn)怪峰，到10針以后每次都出現(xiàn)，時間，峰面積都一樣的，我們最后確定其是乙酸乙酯里的東西。我個人認為，老鼠的吸收能力要比新鼠強 |
2樓2012-05-30 09:21:27
5樓2012-05-30 10:05:32
6樓2012-05-30 15:07:20
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