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[求助]
想獲得較大量的pBR322,卻怎么也提不出來,各位大俠幫幫忙……
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我把質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌,然后搖床擴增,按照分子生物學克隆指南的中提步驟做,加入異丙醇后,離心,有沉淀,而且不少,乙醇洗,開始還有沉淀,但是等它揮發(fā)干的時候,沉淀好像不見了。就算沉淀還在,電泳后,也沒有條帶。很悲劇啊,重復(fù)了兩次了。這是為什么呢?平板含有氨芐,試管擴增時也有氨芐,三角瓶擴增時也加了氨芐,菌液濃度比較好。跟我之前用小提試劑盒提時養(yǎng)的菌是一樣的 為什么提不出來? 各位大俠,我要怎么樣才能獲得較大量的質(zhì)粒呢?萬分感激。! |
新蟲 (初入文壇)
| 我們提質(zhì)粒都是用試劑盒的,一般要獲取大量的質(zhì)粒會增大裂解液buffer p1的用量,裂解時間也稍稍長些,3-4min, 后面的中和反應(yīng)液也相對加大,即buffer p1 到buffer p3都相應(yīng)的加大量,當然這前提是你菌體要養(yǎng)的足夠多。現(xiàn)在也有質(zhì)粒小題中量提取試劑盒,可以試試 |
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