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草帽小子銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
求原核表達(dá)誘導(dǎo)表達(dá)具體操作？？？
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| 我選擇的PET32a，把我差不多600bp的目的片段連入了pet32a。轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌株Rosset。下一步就是要做誘導(dǎo)表達(dá)了！可是我從來都沒做過，還是有好多的細(xì)節(jié)不清楚啊！惶恐，求高人指點(diǎn)！我看別人的文章里用到1XPBS，2XSDS，不知道1XPBS和2XSDS的配方是怎樣的？？Sample Text因為是差不多600bp，所以我的目的蛋白應(yīng)該是21KD左右。不知道選擇PET32a載體，前面是否會多編碼一段蛋白啊？我的目的序列是從ATG開始的！我應(yīng)該選擇分離膠和濃縮膠的濃度各是多大喃？在SDS-PAGE過程中，緩沖液用的是什么��？什么樣的配方�。课覒�(yīng)該怎樣安排對照比較好喃？有什么特別要注意的么？求高人指點(diǎn)！ |
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草帽小子
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送鮮花一朵 9樓2012-06-04 16:48:28
roomofxw
木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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pET32，如果你用NdeI插入的話，那就不會多編碼，用其他的會多出一段TrxA標(biāo)簽，大約11kDa吧，具體請看pET32的圖譜。 1×PBS就是磷酸緩沖液，2×SDS就是濃度兩倍的SDS母液。 至于誘導(dǎo)表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟，見分子克隆實驗指南 SDS-PAGE電泳技術(shù)，具體見蛋白質(zhì)技術(shù)手冊 |
4樓2012-06-04 13:20:06
5樓2012-06-04 14:48:26
草帽小子
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6樓2012-06-04 16:30:50
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