 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 1485 | 回復(fù): 14 | ||
草帽小子銀蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
求原核表達(dá)誘導(dǎo)表達(dá)具體操作？？？
|
| 我選擇的PET32a，把我差不多600bp的目的片段連入了pet32a。轉(zhuǎn)化入表達(dá)菌株Rosset。下一步就是要做誘導(dǎo)表達(dá)了！可是我從來(lái)都沒(méi)做過(guò)，還是有好多的細(xì)節(jié)不清楚啊！惶恐，求高人指點(diǎn)！我看別人的文章里用到1XPBS，2XSDS，不知道1XPBS和2XSDS的配方是怎樣的？？Sample Text因?yàn)槭遣畈欢?00bp，所以我的目的蛋白應(yīng)該是21KD左右。不知道選擇PET32a載體，前面是否會(huì)多編碼一段蛋白��？我的目的序列是從ATG開(kāi)始的！我應(yīng)該選擇分離膠和濃縮膠的濃度各是多大喃？在SDS-PAGE過(guò)程中，緩沖液用的是什么啊？什么樣的配方��？我應(yīng)該怎樣安排對(duì)照比較好喃？有什么特別要注意的么？求高人指點(diǎn)！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有295人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 國(guó)家蛋白質(zhì)科學(xué)中心（上海）（籌）招聘啟事
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 【資料】studier的自動(dòng)誘導(dǎo)系統(tǒng)---原核誘導(dǎo)表達(dá)蛋白，無(wú)需IPTG
已經(jīng)有125人回復(fù)
- 原核表達(dá)蛋白誘導(dǎo)不出來(lái)
已經(jīng)有16人回復(fù)
- 【求助/交流】原核表達(dá) 誘導(dǎo)時(shí)間的長(zhǎng)短影不影響蛋白的活性�。�
已經(jīng)有6人回復(fù)
- 【專(zhuān)題】蛋白新純化思路探討
已經(jīng)有26人回復(fù)
- 【求助/交流】原核pET系統(tǒng)低溫誘導(dǎo)表達(dá)菌體濃度太小怎么辦？
已經(jīng)有7人回復(fù)
- 微生物學(xué)考研資料1(沈萍版同步）免幣分享
已經(jīng)有67人回復(fù)
 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
草帽小子2樓2012-06-04 12:33:38
3樓2012-06-04 12:52:20
roomofxw
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2882.1
- 散金: 69
- 紅花: 7
- 帖子: 755
- 在線: 1020小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 812203
- 注冊(cè): 2009-07-20
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-04 13:42:34
草帽小子: 金幣+10, ★有幫助, 很感謝！ 2012-06-04 16:31:57
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-04 13:42:34
草帽小子: 金幣+10, ★有幫助, 很感謝！ 2012-06-04 16:31:57
|
pET32，如果你用NdeI插入的話，那就不會(huì)多編碼，用其他的會(huì)多出一段TrxA標(biāo)簽，大約11kDa吧，具體請(qǐng)看pET32的圖譜。 1×PBS就是磷酸緩沖液，2×SDS就是濃度兩倍的SDS母液。 至于誘導(dǎo)表達(dá)的標(biāo)準(zhǔn)操作步驟，見(jiàn)分子克隆實(shí)驗(yàn)指南 SDS-PAGE電泳技術(shù)，具體見(jiàn)蛋白質(zhì)技術(shù)手冊(cè) |
4樓2012-06-04 13:20:06
5樓2012-06-04 14:48:26
草帽小子
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1231.8
- 帖子: 215
- 在線: 71.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1360133
- 注冊(cè): 2011-08-03
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
6樓2012-06-04 16:30:50
roomofxw
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 5
- 應(yīng)助: 13 (小學(xué)生)
- 貴賓: 0.005
- 金幣: 2882.1
- 散金: 69
- 紅花: 7
- 帖子: 755
- 在線: 1020小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 812203
- 注冊(cè): 2009-07-20
- 專(zhuān)業(yè): 生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
草帽小子: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝，有問(wèn)題再請(qǐng)教！ 2012-06-04 16:52:39
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-07 13:44:44
草帽小子: 金幣+10, ★★★很有幫助, 謝謝，有問(wèn)題再請(qǐng)教！ 2012-06-04 16:52:39
小丹木木: 金幣+2, 鼓勵(lì)應(yīng)助 2012-06-07 13:44:44
|
http://biotech.ou.edu/ 是預(yù)測(cè)可溶概率的，當(dāng)然只是概率 首先看文獻(xiàn)啊，別人做過(guò)或者類(lèi)似蛋白是不是包涵體 然后就是跑電泳的時(shí)候啊，你跑的全菌，破菌上清，和破菌沉淀里面，目的條帶在沉淀里面的，只要不是破菌沒(méi)破開(kāi)，那就是包涵體了 |
7樓2012-06-04 16:37:00
草帽小子
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1231.8
- 帖子: 215
- 在線: 71.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1360133
- 注冊(cè): 2011-08-03
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
8樓2012-06-04 16:47:53
草帽小子
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1231.8
- 帖子: 215
- 在線: 71.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1360133
- 注冊(cè): 2011-08-03
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
9樓2012-06-04 16:48:28
草帽小子
銀蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1231.8
- 帖子: 215
- 在線: 71.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1360133
- 注冊(cè): 2011-08-03
- 專(zhuān)業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
10樓2012-06-04 16:49:46
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 草帽小子 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料學(xué)碩321求調(diào)劑 +9 | Ymlll 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
[考研] 一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專(zhuān)業(yè)（081702）315分求調(diào)劑 +11 | yangfz 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +6 | 緒幸與子 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料考研調(diào)劑 +3 | xwt。 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 328求調(diào)劑，英語(yǔ)六級(jí)551，有科研經(jīng)歷 +4 | 生物工程調(diào)劑 2026-03-16 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 295求調(diào)劑 +3 | 一志愿京區(qū)211 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +5 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +8 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)071000 329分求調(diào)劑 +3 | 我愛(ài)生物生物愛(ài)?/a> 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +6 | 簡(jiǎn)單點(diǎn)0 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +11 | zjl的號(hào) 2026-03-16 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 考研化學(xué)學(xué)碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +4 | ahbd 2026-03-14 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 277材料科學(xué)與工程080500求調(diào)劑 +3 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 復(fù)試調(diào)劑 +3 | 呼呼？~+123456 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +4 | 學(xué)員97LZgn 2026-03-13 | 4/200 |
|