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loveskyzhou鐵蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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[求助]
點(diǎn)突變引物設(shè)計(jì)問(wèn)題，兩個(gè)試劑盒兩種方法啊。。。。。
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在網(wǎng)上和這里大多看見(jiàn)的引物設(shè)計(jì)是將突變的堿基放在大概30個(gè)堿基的中間，這樣得到完全互補(bǔ)的兩條引物（突變位點(diǎn)除外） 但在全式金的試劑盒說(shuō)明書(shū)里看到如下圖的設(shè)計(jì)方法，問(wèn)題： 1.哪種大家比較常用？ 2.第二種是不是可以一定程度的改善引物二聚的問(wèn)題？ 3.第二種方法反向引物的5'端就是突變位點(diǎn)，這樣可以嗎？如果有影響可不可以在他5'端加幾個(gè)堿基以防止它暴露呢？ 求探討 [ Last edited by loveskyzhou on 2012-6-7 at 12:44 ] |
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【答案】應(yīng)助回帖
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loveskyzhou: 金幣+5, ★★★很有幫助 2012-06-11 20:38:21
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1. 大家一般都用完全互補(bǔ)的兩條引物（突變位點(diǎn)除外）的方法。 2. 第二種方法應(yīng)該是第一種的改進(jìn)，能夠改善引物二聚的問(wèn)題。 3. 5'端就是突變位點(diǎn)也沒(méi)關(guān)系，因?yàn)閜cr過(guò)程不涉及5‘到3’的降解。退一步說(shuō)，即使加保護(hù)堿基，導(dǎo)入細(xì)菌后，保護(hù)堿基的降解也不是希望看到的。而且實(shí)驗(yàn)證明并沒(méi)有被降解。 總之，實(shí)踐是檢驗(yàn)真理的唯一標(biāo)準(zhǔn)。大膽的做，才能知道行不行。個(gè)人建議按照第一種方法做�；蛘邇蓚�(gè)引物有幾個(gè)堿基的錯(cuò)位就好了，以降低引物二聚體的TM值。 |
2樓2012-06-11 10:02:29
xufang7763
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