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一粒小麥鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
xgal藍(lán)白斑實(shí)驗(yàn)遇到問題
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我想驗(yàn)證一段序列是否具有啟動(dòng)子活性，于是改造了pET28a，在多克隆位點(diǎn)處加上一段lacZα做報(bào)告基因，測(cè)序正確，在用Xgal做籃斑實(shí)驗(yàn)是出現(xiàn)以下問題 1、將Xgal直接添加到LB固體培養(yǎng)基到平板，+IPTG不變藍(lán) 2、將Xgal涂在平板表面，+IPTG不變藍(lán) 3、將X-α-Gal倒平板，陰性對(duì)照（我把T7啟動(dòng)子切掉作為陰性對(duì)照菌）也變藍(lán) 我的Xgal是沒問題的，用pCambia1301做陽性對(duì)照劃線是變藍(lán)的。而我的lacZ片段就是從1301里面PCR出來的，經(jīng)過密碼子優(yōu)化去除了5‘端MCS。 另外我的Xgal是用DMSO配置的，這個(gè)應(yīng)該沒影響吧？ 好無助啊，整了好久，先謝謝大家 |
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2樓2012-06-10 16:46:07
3樓2012-06-10 16:47:07
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