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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 求大神分析實驗結果-轉化
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Marado金蟲 (正式寫手)
Dreamer
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[求助]
求大神分析實驗結果-轉化
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對PCR產物進行加A尾，體系如下： PCR產物：40ul 10XTaq Bufferz：5ul dATP：4ul Taq(2.5U/ul)：1ul 總體系：50ul 反應條件：72℃，1h 之后直接取加A尾的PCR產物進行連接，體系如下： 加A后PCR產物：2ul pMD 19：0.5ul Buffer（solution I）3.5ul 過夜連接：12-16h 之后用JM109感受態(tài)細胞進行轉化 涂LE平板（1ml的100mg/ml 氨芐加入到1L的LB培養(yǎng)基） 昨天下午2點半涂完平板（100ul菌液） 37℃培養(yǎng)到晚上10點半，之后置于室溫下（20℃）到今早，發(fā)現(xiàn)沒長- -，請問各位大神，可能是哪個步驟出現(xiàn)了問題，PCR新手，望指教. |
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Marado
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2樓2012-06-12 20:48:19
dajiong
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3樓2012-06-12 22:21:43
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