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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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qazw

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[求助] 生物樣品前處理問(wèn)題

最近做藥動(dòng)，對(duì)于樣品前處理的沉淀蛋白法不太理解。用與水項(xiàng)混溶的有機(jī)溶劑沉淀蛋白時(shí)，比如說(shuō)用乙腈，我取500ul血漿，加入500ul乙腈，渦旋離心后要取上清進(jìn)樣，但是上清的總體積我不知道，取一定量上清進(jìn)樣的話(huà)，提取回收率該怎么算呢？上清液的總體積用不用知道呢？請(qǐng)高手指點(diǎn)迷津。
例：取肝素抗凝血漿600uL，置10mL具塞離心試管中，依次加入內(nèi)標(biāo)溶液50ul和乙腈3mL，渦旋混合，離心，分取上清，于40℃氮?dú)饬飨麓蹈桑瑲堅(jiān)尤肓鲃?dòng)相80ul，渦旋，高速
離心(16000rpm/min)10min，取上清液20uL，注入高效液相色譜儀。
這個(gè)過(guò)程中“分取上清”是把上清液完全取出嗎？并且要確定總的上清量嗎？如果不是的話(huà)，那提取回收率該怎么算呢？

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1樓 2012-06-13 23:21:25

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liuyuanzuo

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中藥2000: 金幣+1, 謝謝 2012-06-14 22:27:22

不需要知道上清的總量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，復(fù)溶，進(jìn)樣。提取回收率在液相里就是用處理后得到的峰面積比上標(biāo)液的峰面積，就行了。
比如空白血漿100uL，加入標(biāo)液50uL，那這就相當(dāng)于標(biāo)液被稀釋了2倍。算提取回收率的時(shí)候你處理后得到的峰面積要乘以2之后再閉上標(biāo)液的峰面積。

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2樓2012-06-14 09:15:39

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2樓: Originally posted by liuyuanzuo at 2012-06-14 09:15:39
不需要知道上清的總量，比如你乙腈加入的是3mL，你上清可以就取2.5上清就好了，吹干，復(fù)溶，進(jìn)樣。提取回收率在液相里就是用處理后得到的峰面積比上標(biāo)液的峰面積，就行了。
比如空白血漿100uL，加入標(biāo)液50uL，那這 ...

“提取回收率在液相里就是用處理后得到的峰面積比上標(biāo)液的峰面積”，但是，我加入3ml乙腈，取出2.5ml上清的話(huà)，這2.5ml上清液中只含部分藥物，況且乙腈溶于水，我的上清液體積也不是3ml吧。也就是說(shuō)如果我上清液取2ml跟取2.5ml，那么吹干之后復(fù)溶進(jìn)樣的到的峰面積跟標(biāo)液比的話(huà)，會(huì)有兩個(gè)不同的結(jié)果，會(huì)嗎？

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3樓2012-06-14 14:34:22

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“比如空白血漿100uL，加入標(biāo)液50uL，那這就相當(dāng)于標(biāo)液被稀釋了2倍。算提取回收率的時(shí)候你處理后得到的峰面積要乘以2之后再閉上標(biāo)液的峰面積�！边@樣應(yīng)該不太對(duì)吧，我上清取2ml和取2.5ml最后都要和標(biāo)液比較。那么回收率不就不一樣了？

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4樓2012-06-14 14:39:15

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4樓: Originally posted by qazw at 2012-06-14 14:39:15
“比如空白血漿100uL，加入標(biāo)液50uL，那這就相當(dāng)于標(biāo)液被稀釋了2倍。算提取回收率的時(shí)候你處理后得到的峰面積要乘以2之后再閉上標(biāo)液的峰面積�！边@樣應(yīng)該不太對(duì)吧，我上清取2ml和取2.5ml最后都要和標(biāo)液比較。那么回 ...

上清你要盡量全取上來(lái)，基本3mL的話(huà)取2.5mL，如果取2mL的話(huà)，你沒(méi)取上來(lái)的0.5mL也算是提取損失的那一部分，明白？比如2.5mL提取回收率為66.可能2mL就是62%。

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5樓2012-06-14 15:02:07

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神啊，跟你取多少上清液沒(méi)關(guān)系，你那個(gè)內(nèi)標(biāo)不就是干這個(gè)使的嘛。內(nèi)標(biāo)法與進(jìn)樣量無(wú)關(guān)，同理推及與取樣量無(wú)關(guān)。

再說(shuō)你標(biāo)液取2.5mL你樣品就取2.5，你標(biāo)液取2mL你樣品就取2，干嘛非弄個(gè)不平行操作啊

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6樓2012-06-14 15:02:49

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6樓: Originally posted by kkbyb at 2012-06-14 15:02:49
神啊，跟你取多少上清液沒(méi)關(guān)系，你那個(gè)內(nèi)標(biāo)不就是干這個(gè)使的嘛。內(nèi)標(biāo)法與進(jìn)樣量無(wú)關(guān)，同理推及與取樣量無(wú)關(guān)。

再說(shuō)你標(biāo)液取2.5mL你樣品就取2.5，你標(biāo)液取2mL你樣品就取2，干嘛非弄個(gè)不平行操作啊

你沒(méi)明白我的意思吧，標(biāo)準(zhǔn)溶液量應(yīng)該是一定的。我取10ul的標(biāo)準(zhǔn)溶液配成模擬生物樣品，然后以乙腈沉淀蛋白處理，最后取出一定量的上清液進(jìn)樣，那么回收率怎么算呢？絕對(duì)回收率是要峰面積進(jìn)行比較的，而不是把內(nèi)標(biāo)牽涉進(jìn)來(lái)的，我標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣出來(lái)的峰面積肯定是一定的（也就是分母），那么模擬生物樣品上清總量未知的話(huà)我怎么知道提取出來(lái)了多少量，又如何去確定回收率呢？

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7樓2012-06-14 20:42:56

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7樓: Originally posted by qazw at 2012-06-14 20:42:56
你沒(méi)明白我的意思吧，標(biāo)準(zhǔn)溶液量應(yīng)該是一定的。我取10ul的標(biāo)準(zhǔn)溶液配成模擬生物樣品，然后以乙腈沉淀蛋白處理，最后取出一定量的上清液進(jìn)樣，那么回收率怎么算呢？絕對(duì)回收率是要峰面積進(jìn)行比較的，而不是把內(nèi)標(biāo)牽 ...

你可以把內(nèi)標(biāo)的峰面積帶進(jìn)去算 ~~一定要確定每次取得上清液的體積，平行操作。

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8樓2012-08-26 17:03:45

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應(yīng)該被稀釋了3倍吧

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9樓2018-05-21 08:27:58

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Matt Luo

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多看看文獻(xiàn)資料。你加入體積都不對(duì)，500微升血漿用500微升乙腈沉淀不夠。

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10樓2018-05-22 07:04:07

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