 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3103 | 回復: 13 | ||
薄荷薰衣原至尊木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
神經(jīng)元細胞microRNA原位雜交 已有1人參與
|
|
|
想在培養(yǎng)的神經(jīng)元細胞上直接做microRNA原位雜交，現(xiàn)在已經(jīng)從exiqon購買回地高辛雙標的探針，如果對照下面的在組織切片上的操作流程，有哪些步驟是需要刪減、增補或修改的？ 1. 脫蠟和水化：二甲苯2次，每次10分鐘；依次經(jīng)100%、95%、80%、75%乙醇和DEPC-H2O各一次，每次5分鐘。 2. 0.2M HCl室溫處理5分鐘。 3. PBS洗3次，每次5分鐘。 4. 蛋白酶K（40μg/ml）室溫孵育20分鐘。 5. 含0.2%甘氨酸的PBS洗3次，每次5分鐘。 6. 4%多聚甲醛固定10分鐘。 7. PBS洗2次，每次5分鐘。 8. 醋酸酐和三乙醇胺溶液室溫孵育10分鐘。 9. PBS洗2次，每次5分鐘； 10.57℃預雜交2小時。 11.57℃雜交4小時。（57℃：探針的雜交溫度） 12.5×SSC洗2次，每次20分鐘。 13.50%去離子甲酰胺/2×SSC 50℃洗3次，每次20分鐘。 14.TBST洗5次，每次5分鐘。 15.室溫封閉1小時。 16.抗地高辛一抗（1：500）4℃孵育過夜。 17.TBST洗4次，10分鐘。 18.BCIP/NBT染色液緩沖液洗2次，每次10分鐘。 19.BCIP/NBT暗處染色約2小時。 20.TE（pH8.0）洗兩次終止反應. 21.水洗殘液，脫水、封片。 有幾個問題想詢問一下： (1)直接在種有神經(jīng)元細胞的玻片上操作，應該不需要進行脫蠟和水化吧？那從哪一步切入比較合適，或是前面的步驟有什么是需要修改的？ (2)步驟2中HCl和步驟4中蛋白酶K的作用各是什么？ (3)在雜交之前，探針需要熱變性不？變性溫度是多少？ (4)TE終止反應，可以用別的溶液替代嗎？ 感謝大家耐心地看到最后，希望走過路過的能多多賜教！不勝感激啊！ |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有170人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 細胞原位雜交樣品處理？
已經(jīng)有3人回復
薄荷薰衣原
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18260
- 帖子: 1100
- 在線: 28.4小時
- 蟲號: 729795
- 注冊: 2009-03-24
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
6樓2013-11-20 09:27:51
薄荷薰衣原
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18260
- 帖子: 1100
- 在線: 28.4小時
- 蟲號: 729795
- 注冊: 2009-03-24
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
10樓2014-04-16 08:31:35
2樓2012-12-20 13:54:00
默默c100
新蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 142.5
- 帖子: 6
- 在線: 4.9小時
- 蟲號: 2249908
- 注冊: 2013-01-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 發(fā)育生物學
3樓2013-09-28 16:18:18
薄荷薰衣原
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18260
- 帖子: 1100
- 在線: 28.4小時
- 蟲號: 729795
- 注冊: 2009-03-24
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
4樓2013-09-29 08:33:42
5樓2013-11-19 14:49:37
xumandw
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1133
- 散金: 3
- 帖子: 39
- 在線: 24.1小時
- 蟲號: 1223426
- 注冊: 2011-03-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學
7樓2014-04-14 20:51:27
薄荷薰衣原
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18260
- 帖子: 1100
- 在線: 28.4小時
- 蟲號: 729795
- 注冊: 2009-03-24
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
8樓2014-04-15 08:50:50
xumandw
銅蟲 (初入文壇)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1133
- 散金: 3
- 帖子: 39
- 在線: 24.1小時
- 蟲號: 1223426
- 注冊: 2011-03-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 神經(jīng)生物學
9樓2014-04-15 18:06:07
相關版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 薄荷薰衣原 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085700資源與環(huán)境308求調(diào)劑 +6 | 墨墨漠 2026-03-18 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學調(diào)劑 +10 | 妮妮ninicgb 2026-03-15 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 266求調(diào)劑 +5 | 陽陽哇塞 2026-03-14 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 本人考085602 化學工程 專碩 +17 | 不知道叫什么！ 2026-03-15 | 19/950 |
|
|
|
[考研] 一志愿南昌大學，327分，材料與化工085600 +3 | Ncdx123456 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 354求調(diào)劑 +4 | Tyoumou 2026-03-18 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 303求調(diào)劑 +4 | 睿08 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +8 | 大可digkids 2026-03-16 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +5 | 上岸的小葡 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工專碩調(diào)劑 +5 | heming3743 2026-03-16 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26申博 +4 | 八6八68 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 藥學383 求調(diào)劑 +3 | 藥學chy 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +3 | 曼殊2266 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 070300化學學碩求調(diào)劑 +6 | 太想進步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 327求調(diào)劑 +6 | 拾光任染 2026-03-15 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國石油大學(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 22408總分284求調(diào)劑 +3 | InAspic 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +4 | 學海漂泊 2026-03-13 | 4/200 |
|