 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 3123 | 回復(fù): 13 | ||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
薄荷薰衣原至尊木蟲 (著名寫手)
|
[求助]
神經(jīng)元細(xì)胞microRNA原位雜交 已有1人參與
|
|
|
想在培養(yǎng)的神經(jīng)元細(xì)胞上直接做microRNA原位雜交，現(xiàn)在已經(jīng)從exiqon購買回地高辛雙標(biāo)的探針，如果對(duì)照下面的在組織切片上的操作流程，有哪些步驟是需要?jiǎng)h減、增補(bǔ)或修改的？ 1. 脫蠟和水化：二甲苯2次，每次10分鐘；依次經(jīng)100%、95%、80%、75%乙醇和DEPC-H2O各一次，每次5分鐘。 2. 0.2M HCl室溫處理5分鐘。 3. PBS洗3次，每次5分鐘。 4. 蛋白酶K（40μg/ml）室溫孵育20分鐘。 5. 含0.2%甘氨酸的PBS洗3次，每次5分鐘。 6. 4%多聚甲醛固定10分鐘。 7. PBS洗2次，每次5分鐘。 8. 醋酸酐和三乙醇胺溶液室溫孵育10分鐘。 9. PBS洗2次，每次5分鐘； 10.57℃預(yù)雜交2小時(shí)。 11.57℃雜交4小時(shí)。（57℃：探針的雜交溫度） 12.5×SSC洗2次，每次20分鐘。 13.50%去離子甲酰胺/2×SSC 50℃洗3次，每次20分鐘。 14.TBST洗5次，每次5分鐘。 15.室溫封閉1小時(shí)。 16.抗地高辛一抗（1：500）4℃孵育過夜。 17.TBST洗4次，10分鐘。 18.BCIP/NBT染色液緩沖液洗2次，每次10分鐘。 19.BCIP/NBT暗處染色約2小時(shí)。 20.TE（pH8.0）洗兩次終止反應(yīng). 21.水洗殘液，脫水、封片。 有幾個(gè)問題想詢問一下： (1)直接在種有神經(jīng)元細(xì)胞的玻片上操作，應(yīng)該不需要進(jìn)行脫蠟和水化吧？那從哪一步切入比較合適，或是前面的步驟有什么是需要修改的？ (2)步驟2中HCl和步驟4中蛋白酶K的作用各是什么？ (3)在雜交之前，探針需要熱變性不？變性溫度是多少？ (4)TE終止反應(yīng)，可以用別的溶液替代嗎？ 感謝大家耐心地看到最后，希望走過路過的能多多賜教！不勝感激啊！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有76人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 細(xì)胞原位雜交樣品處理？
已經(jīng)有3人回復(fù)
kimlee
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 68.2
- 帖子: 94
- 在線: 45.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 423624
- 注冊(cè): 2007-07-21
- 性別: GG
- 專業(yè): 免疫生物學(xué)
5樓2013-11-19 14:49:37
wode0301
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 帖子: 22
- 在線: 5.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1902779
- 注冊(cè): 2012-07-20
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2012-12-20 13:54:00
默默c100
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 142.5
- 帖子: 6
- 在線: 4.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 2249908
- 注冊(cè): 2013-01-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 發(fā)育生物學(xué)
3樓2013-09-28 16:18:18
薄荷薰衣原
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 18260
- 帖子: 1100
- 在線: 28.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 729795
- 注冊(cè): 2009-03-24
- 專業(yè): 腫瘤發(fā)生
4樓2013-09-29 08:33:42
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +3 | Qshers 2026-03-27 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085600 286分 材料求調(diào)劑 +7 | 麻辣魷魚 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學(xué)材料與化工方向336分 +8 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學(xué)材料學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[材料工程] 一志愿C9材料與化工專業(yè)總分300求調(diào)劑 +8 | 曼111 2026-03-24 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 295材料工程專碩求調(diào)劑 +6 | 1428151015 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +8 | 張zz111 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 086000調(diào)劑 +3 | 7901117076 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 07化學(xué)280分求調(diào)劑 +10 | 722865 2026-03-23 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 274求調(diào)劑 +17 | 顧九笙要謙虛 2026-03-24 | 23/1150 |
|
|
|
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9 | 大饞小子 2026-03-27 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 315調(diào)劑 +4 | 0860求調(diào)劑 2026-03-26 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +6 | 田洪有 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 081700 調(diào)劑 267分 +11 | 迷人的哈哈 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿 南京郵電大學(xué) 288分 材料考研 求調(diào)劑 +3 | jl0720 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0854電子信息求調(diào)劑 +7 | α____ 2026-03-22 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +5 | plum李子 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 300分，材料，求調(diào)劑，英一數(shù)二 +5 | 超贊的 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料/農(nóng)業(yè)專業(yè)，07/08開頭均可，過線就行 +3 | 呵唔哦豁 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 293求調(diào)劑 +3 | 濤濤Wjt 2026-03-22 | 5/250 |
|